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基因组提取
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| 我用了老板从国外带回来的一种光合细菌提取基因组，菌名为chloroflexus，但是用CTAB法提的时候发现它出现一种黏黏的东西，以至于提不出基因组。由于资料显示该菌是革兰氏阴性的，所以我尚未用溶菌酶处理，大家有谁有过相似经历，或者有好的解决办法，帮我解决一下，好吗？不甚感激！ |
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2楼2011-05-30 10:46:22
墨香若水
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5楼2011-05-30 23:51:32
hyy229
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6楼2011-06-01 11:47:08
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7楼2011-08-24 11:02:10
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1. 粘稠物质为多糖；可以加溶菌酶，但对G-菌而言，效果并不明显，CTAB就已经够了； 2. 发酵液离心后收集菌体，再用STE悬浮菌体，再离心收集； 3. 减少菌体的用量或加大裂解液的用量； 4. CTAB温浴后最好冷却至室温或4度再抽提；酚/氯仿至少抽提2次，建议加入酚/氯仿后横握离心管，以平放的8字形摇动离心管，这样既可充分使有机相/无机相混匀，又不至于使DNA断裂成小片段，持续不短于5min； 5. 吸取水相时要注意不吸上沉淀，这个你懂的； 6. 最后沉淀时加入异丙醇，混匀后室温静置10min，吸/捞出絮状沉淀，溶于TE或水，OD260/280应该在1.9左右。 |
8楼2011-08-24 17:42:02
