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基因组提取
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| 我用了老板从国外带回来的一种光合细菌提取基因组,菌名为chloroflexus,但是用CTAB法提的时候发现它出现一种黏黏的东西,以至于提不出基因组。由于资料显示该菌是革兰氏阴性的,所以我尚未用溶菌酶处理,大家有谁有过相似经历,或者有好的解决办法,帮我解决一下,好吗?不甚感激! |
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1. 粘稠物质为多糖;可以加溶菌酶,但对G-菌而言,效果并不明显,CTAB就已经够了; 2. 发酵液离心后收集菌体,再用STE悬浮菌体,再离心收集; 3. 减少菌体的用量或加大裂解液的用量; 4. CTAB温浴后最好冷却至室温或4度再抽提;酚/氯仿至少抽提2次,建议加入酚/氯仿后横握离心管,以平放的8字形摇动离心管,这样既可充分使有机相/无机相混匀,又不至于使DNA断裂成小片段,持续不短于5min; 5. 吸取水相时要注意不吸上沉淀,这个你懂的; 6. 最后沉淀时加入异丙醇,混匀后室温静置10min,吸/捞出絮状沉淀,溶于TE或水,OD260/280应该在1.9左右。 |
8楼2011-08-24 17:42:02

2楼2011-05-30 10:46:22
墨香若水
木虫 (著名写手)
小小囧虫
- 应助: 15 (小学生)
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3楼2011-05-30 12:02:50

4楼2011-05-30 13:07:23













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