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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 每次DNA提取后检测结果都如图，连着好几天了，为什么？？？？
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minxufeng

新虫 (初入文坛)

[求助] 每次DNA提取后检测结果都如图，连着好几天了，为什么？？？？已有1人参与

提取黑赤松的DNA，用的是CTAB法，2XCTAB，液氮研磨离心，再加24:1的异丙醇离心3次，取上清液加异丙醇。除了第一次师兄带着时提的还行，后面就如图，找不到原因，很急，很烦，求指导，哪方面没有注意会导致这种结果？？？

为什么
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1楼2012-07-10 22:12:09
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回帖置顶 ( 共有1个 )

peng~yu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, good 2012-07-11 13:51:08
电泳图像为什么是倒着的啊~看着真别扭。
我稍微给你分析一下吧~
1.你跑出来的电泳图的点样孔里面都很亮，说明你提取的DNA有蛋白质的残留，而且残留的比较严重；
2.你跑出的基因组的条带在我看来拖尾比较的严重，这个的话我不清楚是不是因为你这种植物的基因组本来就比较不好提，标准的基因组跑出来应该是一条非常干净的条带才对；
3.你提取的基因组在胶的最下面有很亮的拖尾条带，说明你的RNA消化的不够彻底，建议要是没有加RNA消化的话加一步RNA的消化，要是已经有这个步骤的话就延长一下RNase的消化时间。
另外针对我前面的两条，这一批的样品你可以在用RNase消化以后用试剂盒进行一下纯化，以后提取的时候注意在研磨样品的时候不要太剧烈，另外可以额外的加一步24：1和tris饱和酚的抽提
祝你成功！！
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7楼2012-07-11 09:33:30
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gungunak47

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-11 13:51:27
纯度和产量都不好，这样的结果直接PCR会很辛苦，需要优化很久，效果也不会很稳定，建议重新提取，或用试剂盒，可以试试磁珠法，提取效果很好，提取周期不到1小时
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-07-11 12:08:32
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普通回帖

j2

木虫 (正式写手)
中间有2条带看着还不错啊。加样孔里的是蛋白质吧。。。
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2012-07-10 22:32:55
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minxufeng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by j2 at 2012-07-10 22:32:55
中间有2条带看着还不错啊。加样孔里的是蛋白质吧。。。

是不是我提的DNA没问题，主要是因为跑电泳的胶没有做好？？？图里是每三个一重复，样品和处理方法都一样，但是有的好有的不好……
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3楼2012-07-11 07:48:52
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翠微帝子

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是可以考虑在加异丙醇前先用氯仿除一下蛋白
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4楼2012-07-11 08:46:04
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bioxy

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉你的上样量多了，除了左起9和16号样品，其他的你可以稀释后再上样看看。另外有蛋白和RNA污染，可以加点RNaseA处理后再用氯仿除一下蛋白看看。
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5楼2012-07-11 09:18:38
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白或多糖比较多。

如果是简单的PCR扩增，DNA稀释后应该可以用。
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6楼2012-07-11 09:24:35
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minxufeng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 翠微帝子 at 2012-07-11 08:46:04
是不是可以考虑在加异丙醇前先用氯仿除一下蛋白

抽提了3次，能保证没有蛋白，至少抽的时候一点蛋白都没有
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8楼2012-07-11 09:35:22
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minxufeng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by peng~yu at 2012-07-11 09:33:30
电泳图像为什么是倒着的啊~看着真别扭。
我稍微给你分析一下吧~
1.你跑出来的电泳图的点样孔里面都很亮，说明你提取的DNA有蛋白质的残留，而且残留的比较严重；
2.你跑出的基因组的条带在我看来拖尾比较的严重， ...

谢谢您，有一点我不太明白，为什么研磨样品的时候不要能太剧烈？不是越粉越好？
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9楼2012-07-11 09:40:11
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