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[交流]
基因组DNA提取结果
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从一开始做分子生物学实验，心中就有一个疑问：按照PROTOCOL提取出的DNA，电泳后呈现的条带数量，会不会正好就是染色体的数量。后来知道，DNA提取受到很多方面影响，提取出的DNA已经受到一定程度损伤，因此条带数目不确定。如图，图一显示的两种不同微藻的DNA提取结果。一般情况下，按照我实验室现有PROTOCOL提取出的DNA如右泳道所示，有一条几KB的条带同时带有拖尾。左边泳道未见条带，仅有拖尾，属于此次实验的特殊情况，该微藻之前DNA提取结果亦同右泳道。然而，用通用引物对其进行PCR，结果如图二，都得到了较好的结果。 我不是在此讨论我的实验结果，只是想和大家研究讨论下DNA提取结果是什么样子，其受什么条件影响。在以前的实验室，用另一份PROTOCOL，电泳结果往往是几条几百BP和一两条上千BP的条带；而现在的PROTOCOL却带来了图示结果。我想知道，到底是否是PROTOCOL影响了DNA的提取结果。如果是，为什么有图一这样的结果；如果不是，为什么用不同PROTOCOL，同一种微藻提取出的电泳结果不同？是否还有其他影响因素？ 欢迎大家讨论交流，同时希望把你们的电泳结果发到这里来给各位看一下。 PS:为什么好的RNA提取结果往往是电泳时看到三条清楚的条带？无论什么方法都这样吗？  gDNA  PCR |
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7楼2013-01-14 08:54:07
5楼2013-01-13 19:24:49
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leon198418029(金币+1): 谢谢参与
leon198418029(金币+1): 谢谢参与
| 基因组DNA提取的时候即使很小心，也是被shear成十几K-几十K的片段的。不可能提出几M或者几十M大小的完整分子。你说的不同的方法不知道是哪里不同。我觉得主要的区别是操作中的机械力和杂质清除是否完全。一般提出来比较干净的DNA是会看到一条大于10K的带。你说的几百bp可能是没有完全降解掉的RNA。至于PCR的结果，因为机械力作用下DNA的断裂是随机的，如果DNA不是弄得太碎了，都应该可以P出来，所以你的两个样品都有扩增。当然断裂少的样品效果会更好一些。 |
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