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nestzhao

木虫 (小有名气)

[求助] 求助:大肠杆菌基因组的提取

最近进行大肠杆菌基因组的提取,提出来以后电泳结果不是很满意:基因组提完以后,进行电泳检测,上样的时候,总有种往外要飘出来的感觉,跑完电泳以后,基因组的条带亮度很亮,但是有种边缘很虚的感觉,不是很规则的条带,在2k左右会有一个条带,亮度不是很高,其他情况都正常。(质粒是用试剂盒提的,以前已经用过几次,都是正常的,电泳时marker的条带也是正常的)。
向请大家请教一下,这是什么原因??
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给力2011
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ty1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-22 21:41:40
nestzhao(金币+2): 2011-06-22 21:46:15
"上样的时候,总有种往外要飘出来的感觉",貌似是杂质含量比较多,DNA纯度不高,另外染色体一般不会断到2KB啊,请问楼主提染色体的目的是什么,如果是调基因的话,可以直接PCR获得目的基因,有时作为模板,对于染色体要求并不是很高。
2楼2011-06-22 20:28:49
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zboter

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看不懂,你是在提基因组还是质粒
3楼2011-06-22 20:48:53
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
nestzhao(金币+1): 2011-06-24 14:49:46
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-24 16:16:48
飘是因为乙醇没有挥发干净,我之前做的时候也是这样的。我也在提取大肠杆菌基因组DNA,但是现在提取的都是降解的,很是不解
4楼2011-06-24 14:42:29
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nestzhao

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2011-06-24 14:42:29:
飘是因为乙醇没有挥发干净,我之前做的时候也是这样的。我也在提取大肠杆菌基因组DNA,但是现在提取的都是降解的,很是不解

我最近提的感觉也有点降解的,跑PCR也会有杂带。
以前都是正常的,还是同一个菌的,真不知道是为什么
给力2011
5楼2011-06-24 14:52:09
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

有同感,以前随便怎么提都不讲解,现在总不行,楼主有什么经验分享一下,帮我度过难关
6楼2011-06-25 13:34:52
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nestzhao

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2011-06-25 13:34:52:
有同感,以前随便怎么提都不讲解,现在总不行,楼主有什么经验分享一下,帮我度过难关

我也没啥经验可言,一直都很不顺,唉
给力2011
7楼2011-06-25 13:47:49
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