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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】凝胶电泳
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】凝胶电泳 已有7人参与

我提的大肠杆菌基因组总DNA 跑0.7%的琼脂糖凝胶电泳后 点样孔中仍有部分亮点，是什么原因啊?  （附上图）
另外，之前我曾用48000bp的DNA做marker跑大肠杆菌基因组总DNA凝胶电泳，从电泳图上看基因组总DNA跑得比marker远，但是我从网上查的大肠杆菌基因组总DNA长度是400多万bp，这是什么原因呢？

[ Last edited by lilirong2009 on 2010-8-13 at 12:58 ]
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1楼 2010-08-13 12:52:36
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励 2010-08-13 13:49:44
marker一般是线状
大肠杆菌基因组是环状吧

点样孔里有东西的话，可能是样品不够纯，裹着DNA

[ Last edited by ben1147 on 2010-8-13 at 13:57 ]
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2楼2010-08-13 13:41:39
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★ ★ ★
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看天(金币+2):鼓励回答 2010-08-13 13:49:54
为什么喜欢把胶倒过来看呢？是用试剂盒提的吧？跟marker比的大小不用管它，这么多提的还不错了，就是有一些些杂质没去干净，多糖啊，蛋白质之类的，再用酚氯仿抽提一次试试。
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金币是赌出来的
3楼2010-08-13 13:43:01
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-13 18:37:50
用试剂盒提的话，不至于样品不纯导致跑成这样的结果吧。不过可以试下胶回收以后再跑下电泳。建议跑电泳的时候一定要跑marker。
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4楼2010-08-13 14:41:57
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)
不是用试剂盒提的啊，手提的！  另外，大肠杆菌基因组DNA有多大啊
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5楼2010-08-13 15:19:35
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-13 18:37:58
引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2010-08-13 15:19:35:
不是用试剂盒提的啊，手提的！  另外，大肠杆菌基因组DNA有多大啊

完整性较好的话，不论什么物种的gDNA电泳大小都为23kb左右，当然也会有一定偏差，但基本上都在λ Hind III marker最大的那个条带附近。
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6楼2010-08-13 15:35:44
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)
用酚氯仿再处理了，结果DNA都不见了
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7楼2010-08-15 10:55:58
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)
今天又重新提取了，除多糖和蛋白的步骤都增加了，乙醇洗液多洗了几遍，可是上样量0.5微升的时候点样孔里面还是亮的，杯具啊！可是纯度都在1.8左右啊。

[ Last edited by lilirong2009 on 2010-8-15 at 20:07 ]
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8楼2010-08-15 10:59:32
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

…………………………

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
都不见了？？悲剧啊，沉淀的时候把DNA倒掉了吧。提得时候可以试着放大体积，那样杂质除的也能干净点。另外浓度太高也有可能出现胶孔亮，电泳的样品可以稀释一下。
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金币是赌出来的
9楼2010-08-16 09:53:36
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lilirong2009

铜虫 (小有名气)
谢谢楼上
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10楼2010-08-17 07:59:50
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