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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 聚丙烯酰胺凝胶电泳问题的讨论
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

[求助] 聚丙烯酰胺凝胶电泳问题的讨论

大家好，我在做蛋白质电泳时遇到一个很棘手的问题，我的电泳一共点了四个样，为什么脱完色后，出现了两条带，且这两条带都是一横条，横跨胶的宽度，我点这四个样时也有间隔啊，为什么最后都连起来了啊！我的问题在哪啊？求助......
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只要努力，总会有结果的
1楼 2012-03-01 16:12:49
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necilyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上样量是不是太大了~~
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聪明才智要为意外做准备~~
2楼2012-03-01 16:48:32
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
是不是插梳子时不够快，导致没有凝胶槽啊…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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···
3楼2012-03-01 18:12:27
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
是不是插梳子时不够快，导致没有形成可用的凝胶槽啊…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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···
4楼2012-03-01 18:12:45
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by necilyx at 2012-03-01 16:48:32:
上样量是不是太大了~~

我现在怀疑我的样品制备是不是有问题，我想测我的细菌是否代谢脂肪酶，我想测菌悬液中是否含脂肪酶，我想电泳检测一下，样品该怎么制备啊？能不能直接拿菌悬液跟上样缓冲混合后直接点样啊？谢谢
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只要努力，总会有结果的
5楼2012-03-01 23:57:28
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by necilyx at 2012-03-01 16:48:32:
上样量是不是太大了~~

我现在怀疑我的样品制备是不是有问题，我想测我的细菌是否代谢脂肪酶，我想测菌悬液中是否含脂肪酶，我想电泳检测一下，样品该怎么制备啊？能不能直接拿菌悬液跟上样缓冲混合后直接点样啊？谢谢
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只要努力，总会有结果的
6楼2012-03-01 23:58:11
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necilyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
秦川萝卜头: 金币+5 2012-03-21 19:56:43
引用回帖:
6楼: Originally posted by 秦川萝卜头 at 2012-03-01 23:58:11:
我现在怀疑我的样品制备是不是有问题，我想测我的细菌是否代谢脂肪酶，我想测菌悬液中是否含脂肪酶，我想电泳检测一下，样品该怎么制备啊？能不能直接拿菌悬液跟上样缓冲混合后直接点样啊？谢谢

脂肪酶应该是胞内酶，应该破碎细胞再提蛋白，加缓冲液混合变形后上样，菌液直接混合缓冲液上样跑蛋白我还真没做过~~
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聪明才智要为意外做准备~~
7楼2012-03-02 10:09:37
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by necilyx at 2012-03-02 10:09:37:
脂肪酶应该是胞内酶，应该破碎细胞再提蛋白，加缓冲液混合变形后上样，菌液直接混合缓冲液上样跑蛋白我还真没做过~~

提蛋白？我先前用过硫酸铵盐析法提蛋白，但是蛋白不溶于缓冲液呀？不知该怎么办，因为我是学化学的对这方面不是很懂，希望您能耐心指点指点  谢谢
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只要努力，总会有结果的
8楼2012-03-02 13:02:46
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痴客

木虫 (正式写手)

吃货250

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
之前碰到过一次，上样的时候溢出来会使结果连在一起
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因为这个世界上这么多的狼，我这只牧羊犬只好放弃我的温顺，向着这个世界放出最耀眼的光。
9楼2012-03-02 15:39:36
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gogen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同楼上，减少上样量看看，或者是你浓缩胶做漏了。。记得以前好像遇过这类问题。。。多重复，就能解决，熟能生巧么
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10楼2012-03-02 16:47:48
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