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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

[求助] 聚丙烯酰胺凝胶电泳问题的讨论

大家好,我在做蛋白质电泳时遇到一个很棘手的问题,我的电泳一共点了四个样,为什么脱完色后,出现了两条带,且这两条带都是一横条,横跨胶的宽度,我点这四个样时也有间隔啊,为什么最后都连起来了啊!我的问题在哪啊?求助......
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只要努力,总会有结果的
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necilyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上样量是不是太大了~~
聪明才智要为意外做准备~~
2楼2012-03-01 16:48:32
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

是不是插梳子时不够快,导致没有凝胶槽啊…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
···
3楼2012-03-01 18:12:27
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

是不是插梳子时不够快,导致没有形成可用的凝胶槽啊…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
···
4楼2012-03-01 18:12:45
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by necilyx at 2012-03-01 16:48:32:
上样量是不是太大了~~

我现在怀疑我的样品制备是不是有问题,我想测我的细菌是否代谢脂肪酶,我想测菌悬液中是否含脂肪酶,我想电泳检测一下,样品该怎么制备啊?能不能直接拿菌悬液跟上样缓冲混合后直接点样啊?谢谢
只要努力,总会有结果的
5楼2012-03-01 23:57:28
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by necilyx at 2012-03-01 16:48:32:
上样量是不是太大了~~

我现在怀疑我的样品制备是不是有问题,我想测我的细菌是否代谢脂肪酶,我想测菌悬液中是否含脂肪酶,我想电泳检测一下,样品该怎么制备啊?能不能直接拿菌悬液跟上样缓冲混合后直接点样啊?谢谢
只要努力,总会有结果的
6楼2012-03-01 23:58:11
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necilyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
秦川萝卜头: 金币+5 2012-03-21 19:56:43
引用回帖:
6楼: Originally posted by 秦川萝卜头 at 2012-03-01 23:58:11:
我现在怀疑我的样品制备是不是有问题,我想测我的细菌是否代谢脂肪酶,我想测菌悬液中是否含脂肪酶,我想电泳检测一下,样品该怎么制备啊?能不能直接拿菌悬液跟上样缓冲混合后直接点样啊?谢谢

脂肪酶应该是胞内酶,应该破碎细胞再提蛋白,加缓冲液混合变形后上样,菌液直接混合缓冲液上样跑蛋白我还真没做过~~
聪明才智要为意外做准备~~
7楼2012-03-02 10:09:37
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秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by necilyx at 2012-03-02 10:09:37:
脂肪酶应该是胞内酶,应该破碎细胞再提蛋白,加缓冲液混合变形后上样,菌液直接混合缓冲液上样跑蛋白我还真没做过~~

提蛋白?我先前用过硫酸铵盐析法提蛋白,但是蛋白不溶于缓冲液呀?不知该怎么办,因为我是学化学的对这方面不是很懂,希望您能耐心指点指点  谢谢
只要努力,总会有结果的
8楼2012-03-02 13:02:46
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痴客

木虫 (正式写手)

吃货250

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
之前碰到过一次,上样的时候溢出来会使结果连在一起
因为这个世界上这么多的狼,我这只牧羊犬只好放弃我的温顺,向着这个世界放出最耀眼的光。
9楼2012-03-02 15:39:36
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gogen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同楼上,减少上样量看看,或者是你浓缩胶做漏了。。记得以前好像遇过这类问题。。。多重复,就能解决,熟能生巧么
10楼2012-03-02 16:47:48
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