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水云

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】关于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

以前一直做变性电泳,最近出现个问题,做纯化的时候某些蛋白怎么也出不去,而且显示分子量很大,在200KD以上。有人推荐做一次非变性看看。
问一下,非变性的条件怎么样,是不是就是配胶的时候有点差别?
非变性和分子量与电荷都有关系,怎么确定某个蛋白的具体位置呢?用marker么?
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★ ★ ★
水云(金币+1): 2011-02-23 09:23:33
dhd997(金币+3): good 2011-02-23 09:46:51
非变性在配胶、buffer、loading buffer 中均不能有变性剂存在。在上样之前也不能煮。

我们跑非变性都是在纯度大于95%的情况下为了检测蛋白是不是有多聚。
2楼2011-02-23 09:20:39
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水云

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-23 01:20:39:
非变性在配胶、buffer、loading buffer 中均不能有变性剂存在。在上样之前也不能煮。

我们跑非变性都是在纯度大于95%的情况下为了检测蛋白是不是有多聚。

恩,对,我们也考虑是不是有多聚体存在。
我看有些人用非变性做活性分析,那么我有个问题就是,在有电荷和分子量两个影响因素的情况下,怎么确定目的蛋白的位置呢?
3楼2011-02-23 09:23:26
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水云(金币+1): 2011-07-07 14:45:09
引用回帖:
Originally posted by 水云 at 2011-02-23 01:23:26:
恩,对,我们也考虑是不是有多聚体存在。
我看有些人用非变性做活性分析,那么我有个问题就是,在有电荷和分子量两个影响因素的情况下,怎么确定目的蛋白的位置呢?

呵呵,位置是无法确定的哦。只能通过目的蛋白的量和杂蛋白的量来看,毕竟95%都是你的目的蛋白嘛,条带自然会很粗。
4楼2011-02-23 11:46:50
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