24小时热门版块排行榜    

查看: 4092  |  回复: 39

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

[交流] 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带 已有27人参与

模板用基因组DNA,引物碱基数25,GC含量为64和56,Tm值为68.54和65.26
目的带约2.2K
我试过退火温度58  60  63  65  66  68
酶试过rTaq   ExTaq   还有高保真酶
buffer也换过几种

大多数时候出现引物二聚体,有时出现估计几十K但很弱的条带(接近上样孔的地方),有时什么都没


很郁闷,很无助


问题在哪里呀?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

每天进步一点点,持之以恒!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)


张晓梅ZXM(金币+1):谢谢参与
张晓梅ZXM(金币+1): 2010-08-27 16:40:14
引用回帖:
Originally posted by 张晓梅ZXM at 2010-08-27 10:26:31:
模板用基因组DNA,引物碱基数25,GC含量为64和56,Tm值为68.54和65.26
目的带约2.2K
我试过退火温度58  60  63  65  66  68
酶试过rTaq   ExTaq   还有高保真酶
buffer也换过几种

大多数时候出现引物二聚体 ...

可能引物设计失败。还有你要保证你的体系能扩出东西来,你的基因组质量是好的。
2楼2010-08-27 12:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


张晓梅ZXM(金币+1):谢谢参与
几十k? 模板加多了吧
3楼2010-08-27 12:04:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fykxy_206

木虫 (正式写手)


张晓梅ZXM(金币+1):谢谢参与
温度再降低点,引物重新设计,最好有好几对引物一块做。
4楼2010-08-27 14:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lfkey

木虫 (初入文坛)

★ ★
张晓梅ZXM(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+1):鼓励交流 2010-08-31 11:51:24
温度太低特异性会减弱,我觉得不能低于60度,引物可以少加点,另外摸索退火温度时间隔可以再小点;重新设计引物到可以考虑一下。检测能否扩增出条带的话,我觉得应该没有酶或者buffer的事。
年轻没有失败!
5楼2010-08-27 16:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diana0423

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
试下加点二甲亚砜
6楼2010-08-27 19:51:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

引用回帖:
Originally posted by 张晓梅ZXM at 2010-08-27 10:26:31:
模板用基因组DNA,引物碱基数25,GC含量为64和56,Tm值为68.54和65.26
目的带约2.2K
我试过退火温度58  60  63  65  66  68
酶试过rTaq   ExTaq   还有高保真酶
buffer也换过几种

大多数时候出现引物二聚体 ...

体系应该没问题,我之前类似的做了很多~~~~~~~
每天进步一点点,持之以恒!
7楼2010-08-31 10:30:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-27 12:00:09:

可能引物设计失败。还有你要保证你的体系能扩出东西来,你的基因组质量是好的。

体系和基因组应该没问题,我之前类似的做过很多~~~~
每天进步一点点,持之以恒!
8楼2010-08-31 10:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

引用回帖:
Originally posted by fykxy_206 at 2010-08-27 14:05:32:
温度再降低点,引物重新设计,最好有好几对引物一块做。

几对引物的确实没做过~~
每天进步一点点,持之以恒!
9楼2010-08-31 10:32:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

引用回帖:
Originally posted by diana0423 at 2010-08-27 19:51:41:
试下加点二甲亚砜

已经试过了
每天进步一点点,持之以恒!
10楼2010-08-31 10:32:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张晓梅ZXM 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:33 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:09 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:00 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:37 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 14:57 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
[基金申请] 面上有专家说实验设备不是我们单位的 +6 zj_muchong 2026-09-08 8/400 2026-09-11 06:56 by suifengdao
信息提示
请填处理意见