| 查看: 1956 | 回复: 14 | ||
wangcongxs银虫 (著名写手)
|
[求助]
PCR不出带，求教
|
| 我用酶切连接后的产物进行预扩增，退火温度度降到48度才有目的带（引物TM值一条55.75，一条52.18），然后把预扩增产物稀释10倍进行选扩增，跑6%的变性PAGE，PCR25ul的体系，buffer2.5ul，镁离子1.5，DNTP1.0，引物（10uM）1.5，rTaq0.3，PCR程序用touchdown，从65降至56。我用的是我们老师做的体系，只是模板不一样，可是物种是一样的，为什么一直扩不出带啊，难道预扩就是假阳性？但是退火温度高了只有弥散啊，请各位朋友帮忙提提意见……不胜感激！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有264人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- PCR高手请进，小女子有事相求，我刚来金币不要嫌少啊，我只有这么多啊，全给你了
已经有20人回复
- 请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来
已经有28人回复
- 求助PCR老是跑不出条带
已经有16人回复
- 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？
已经有24人回复
- 【求助/交流】PCR怎么都p不出来东西
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR求助，做不出来找不到原因
已经有16人回复
- 【求助/交流】为什么用纯化的PCR产物就扩不出来？？？
已经有14人回复
- 【求助/交流】pcr p不出特异性条带
已经有13人回复
- 【求助/交流】RT-PCR不成功
已经有25人回复
- 【求助/交流】PCR总是做不出来，请帮忙分析下原因
已经有12人回复
shenye.judy
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 25 (小学生)
- 金币: 2350.7
- 红花: 1
- 帖子: 501
- 在线: 53.7小时
- 虫号: 310766
- 注册: 2006-12-24
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-10 13:46:20
wangcongxs: 金币+5 2012-07-17 08:07:35
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-10 13:46:20
wangcongxs: 金币+5 2012-07-17 08:07:35
|
预扩增用了48度才有的，之后是65降至56，在48度之上，没有产物似乎也有道理。 PCR体系中镁离子浓度也是关键，你可以查查，然后调整或者做梯度。 如果你们老师同样体系做出来，你没做出来，那就是模板有问题的可能性还是比较大的. 当然，你也要确定你的预扩增条带是正确的。 预扩增弥散的产物也可以试试往下做，可能是你的引物不够特异，扩出了其它，但应该包含你的目标吧？ 也不知道你是在做什么，所以只能这样回答些。 |
2楼2012-07-10 10:50:45
wangcongxs
银虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1717.1
- 散金: 1461
- 红花: 23
- 帖子: 1289
- 在线: 116.7小时
- 虫号: 1284970
- 注册: 2011-05-04
- 性别: MM
- 专业: 林木遗传育种学
3楼2012-07-17 08:10:38
4楼2012-07-17 08:56:53
reallpf
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 150 (高中生)
- 金币: 3388.3
- 散金: 2
- 红花: 12
- 帖子: 342
- 在线: 72.6小时
- 虫号: 1892494
- 注册: 2012-07-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-07-17 09:02:01
shenye.judy
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 25 (小学生)
- 金币: 2350.7
- 红花: 1
- 帖子: 501
- 在线: 53.7小时
- 虫号: 310766
- 注册: 2006-12-24
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
6楼2012-07-17 19:12:17
wangcongxs
银虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1717.1
- 散金: 1461
- 红花: 23
- 帖子: 1289
- 在线: 116.7小时
- 虫号: 1284970
- 注册: 2011-05-04
- 性别: MM
- 专业: 林木遗传育种学
7楼2012-07-18 10:33:19
wangcongxs
银虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1717.1
- 散金: 1461
- 红花: 23
- 帖子: 1289
- 在线: 116.7小时
- 虫号: 1284970
- 注册: 2011-05-04
- 性别: MM
- 专业: 林木遗传育种学
8楼2012-07-18 10:42:03
wangcongxs
银虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1717.1
- 散金: 1461
- 红花: 23
- 帖子: 1289
- 在线: 116.7小时
- 虫号: 1284970
- 注册: 2011-05-04
- 性别: MM
- 专业: 林木遗传育种学
谢谢！ 9楼2012-07-18 10:44:56
reallpf
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 150 (高中生)
- 金币: 3388.3
- 散金: 2
- 红花: 12
- 帖子: 342
- 在线: 72.6小时
- 虫号: 1892494
- 注册: 2012-07-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
10楼2012-07-18 11:01:10
