应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr p不出特异性条带
141/2返回列表12下一页
查看: 2557  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

薄荷zwz

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pcr p不出特异性条带 已有12人参与

我最近做的pcr  目的片段是1194，做了三次pcr 分别用59   61   63度的退火温度，在62度是能p出来条带，但是非特异性条带很多，提高到63度是出现一条大约在800bp的条带   ，不知道是怎么回事
            模板  1
            引物   1
                       1
             酶   0.5
            水   23
           buffer  3
          dNTP    1
这是体现，请教大家了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-25 11:38:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang.hai.f

木虫 (小有名气)
我也是新手，不好意思
赞一下 回复此楼
2楼2010-08-25 11:49:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张焕春

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是引物不好
回复此楼
3楼2010-08-25 12:14:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

怎么都行

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):很全面，很活跃~ 2010-08-25 12:37:42
对于你说的情况，62度能扩增而63度只扩出一条非目的带，我猜你可以用touch down PCR试试，退火温度由65度降落到60度， 每循环降落0.5度，10个循环，后20个循环用60度退火。
还有，你的引物设计出来后有没有BLAST比对过，说不定该对引物能跟该物种基因组的其他位置更易结合引发。
还有一个可能，你设计的这段引物在该物种基因组的变异热点区域，存在序列deletion等变异方式，你用作引物设计的模板序列在该区域长度是1194，但你做的那个生物株系或许就只有800bp左右也说不定。
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2010-08-25 12:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crydevil

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果体系没有问题的话，做个梯度退火试试在哪个温度能出来目的片段，前提是你一定要清楚目的片段大小
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-08-25 13:53:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

薄荷zwz

新虫 (小有名气)

补充

我在退火温度是61时曾经p出特异条带，但是其中有很多非特异条带
赞一下 回复此楼
6楼2010-08-25 19:39:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
反应体系有问题，你能把每个反应组分的浓度标出来吗
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-08-25 19:44:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vivihao

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
就62度扩增，多加几个循环条带就量了。
再摸一下反应体系。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-08-25 20:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huanshi

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你既然可以p出非特异，体系就先不讨论了。

想问下，既然62可以 P出来，那你59没有P出来吗？

另外把你引物的序列和所要扩增的基因名称发上来，让大家分析看看。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-08-25 21:11:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

薄荷zwz

新虫 (小有名气)
silicare:新手上路，有些错误是难免的，也算收获了一个经验值 2010-08-28 09:21:34
刚刚发现下游引物设计反了
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-08-27 16:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员Al9wia 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +5 上班不着吉 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:37 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +14 王晓阳- 2026-03-09 19/950 2026-03-14 02:05 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:06 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:56 by houyaoxu
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +5 RuitingC 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:43 by hyswxzs
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭