应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么有的样品批不出来东西，DNA检测时挺好的啊
271/3返回列表123下一页
查看: 3186  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qidannvzi

银虫 (正式写手)

[求助] 为什么有的样品批不出来东西，DNA检测时挺好的啊

金币全散了，因为我心情超不好，想把钱都花了买衣服，无奈太肥，还要减，还要吃饭。就把金币都花了，这也是我辛辛苦苦天天领的，很少灌水的，还有提心吊胆冒险领来的。我的问题是，我做SCOT的分子标记，DNA检测时，都挺好的，可是为什么PCR后用琼脂糖检测，有的样本一个条带也没有，我很郁闷，跑不出差异也就算了，还跑不出来条带，各位大侠中，有跑过分子标记，品种鉴定之类的，多提宝贵意见，没啥可回报的，就是有金币！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
准备跨新年！
1楼 2012-03-17 21:43:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

DARKSEA2522

金虫 (著名写手)
qidannvzi: 回帖置顶 2012-03-19 13:34:36
送花祝福，祝心情会好起来！
赞一下 回复此楼
14楼2012-03-19 09:20:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

alicejie2005

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-03-19 08:25:09
退火温度高了，建议降低退火温度，做个梯度实验比较好。
另外就是引物设计的时候，5端退火温度尽量高，就是GC碱基多，3端尽量别有GC，最好是T。
引物设计占更大的比重。
希望能对你有帮助。
加油哦
赞一下(1人) 回复此楼
感动你我的开心，是我们共同的冥想
10楼2012-03-19 06:34:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zheng~8804

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+20, ★★★很有帮助, 我试试！ 2012-03-19 08:12:26
pcr产物没东西
牵扯的因素比较多
建议先把引物单独跑一跑 看引物的条带如何
其次 pcr反应的体系也很重要 （我一般用25ul体系，因人而异）
DNA 1ul
mix  12.5ul
引物 2ul 上下游总共
补足水
分子标记 循环设30个足够
退火温度很重要  引物单子会给出 一般是tm-10度
赞一下(1人) 回复此楼
这世界上有三样东西是别人抢不走的：一是胃里吃紧的东西，二是藏在心里的梦想，三是读进大脑的书！！！
11楼2012-03-19 07:15:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-03-20 08:06:56
西瓜: 金币+2, 鼓励应助！荧光定量太贵了，有点不划算哈~ 2012-03-20 11:56:33
建议你做个温度梯度PCR，同时对你的引物做下primer-blast验证引物特异性。如果还弄不出来，你仔细检查下步骤不会是跑胶忘加EB了吧？实在没结果的话你还可以做下荧光定量PCR，看看扩增曲线怎么样，这样可以实时监测你的PCR产物
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2012-03-19 22:33:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-20 11:56:44
1 如果是引物的问题，那么你就要从设计的引物中筛选出扩增结果稳定，条带清晰，有多态性的引物
2 如果是PCR的条件问题，那么你就要看下退火温度是否合理，有没有需要加入Mg离子来提高反应的效率
3 如果是样品本身的问题，那么你说DNA是没有问题的，有DNA，但是能否确认标记上了，并且具有这种多态性，还有加样做PCR的时候是不是忘了加模板或者没加到体系里去？
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2012-03-20 09:41:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

水泗晶

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+5, ★有帮助 2012-03-19 08:16:44
可能是引物没有设计好，可能是PCR体系没有优化，可能是反应程序没有设定好，尤其是温度，退火温度或者延伸温度。你有做过梯度吗？连带都没有，marker带有吗？
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-18 10:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjb3344

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+30, ★★★很有帮助 2012-03-19 08:26:28
pcr产物没东西
牵扯的因素比较多
建议先把引物单独跑一跑 看引物的条带如何
其次 pcr反应的体系也很重要 （我一般用25ul体系，因人而异）
DNA 1ul
mix  12.5ul
引物 2ul 上下游总共
补足水
分子标记 循环设30个足够
退火温度很重要  引物单子会给出 一般是tm-10度
赞一下 回复此楼
不论在世界的任何角落·都要感到幸福
3楼2012-03-18 18:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a731705125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+10, ★★★很有帮助, 不是，我喜欢吃油泼面！ 2012-03-19 08:18:01
我们用的50ul的体系
上下游各1ul
Temple 1ul
等等
我今天有个pcr也没条带，打算再p一次试试，降低点退火温度。
还有楼主把头像换个呗，是不是想天天看到面条最后看到*心就不想再吃面条了么？
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-18 19:45:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdezhou84
祝福
5楼2012-03-18 20:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yumijenny

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+20, ★★★很有帮助, 多谢了！ 2012-03-19 08:18:35
PCR没有条带，首先确定是不是药品的问题，可以换一下所有的药品，尤其是酶。如果还是P不出来，有可能是体系不合适或者退火温度太高，可以试一下降低退火温度，但有可能有特异性条带。可以尝试下多加一点Mg离子或者酶。我之前也有段时间PCR总是P不出来，后来药品全换，酶多加了一倍就很顺利了
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-18 23:12:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yumijenny

木虫 (小有名气)
上面写错了，非特异性条带，不好意思
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-18 23:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxl4054

铁杆木虫 (知名作家)

薛定谔的喵星人
这个我不懂  没金币了给偶发站内信  给你赞助哈
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-18 23:33:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

missyou8326
9楼2012-03-19 00:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qidannvzi 的主题更新
271/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭