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zheng~8804

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qidannvzi: 金币+20, ★★★很有帮助, 我试试! 2012-03-19 08:12:26
pcr产物没东西
牵扯的因素比较多
建议先把引物单独跑一跑 看引物的条带如何
其次 pcr反应的体系也很重要 (我一般用25ul体系,因人而异)
DNA 1ul
mix  12.5ul
引物 2ul 上下游总共
补足水
分子标记 循环设30个足够
退火温度很重要  引物单子会给出 一般是tm-10度
这世界上有三样东西是别人抢不走的:一是胃里吃紧的东西,二是藏在心里的梦想,三是读进大脑的书!!!
11楼2012-03-19 07:15:45
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qidannvzi

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangdezhou84 at 2012-03-18 20:19:28:
祝福

谢谢了,你也是,实验顺利!
准备跨新年!
12楼2012-03-19 08:18:19
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qidannvzi

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hxl4054 at 2012-03-18 23:33:43:
这个我不懂  没金币了给偶发站内信  给你赞助哈

呵呵,好人那,谢谢啊,没事,我慢慢攒!
准备跨新年!
13楼2012-03-19 08:21:31
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DARKSEA2522

金虫 (著名写手)

qidannvzi: 回帖置顶 2012-03-19 13:34:36
送花祝福,祝心情会好起来!
14楼2012-03-19 09:20:16
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qidannvzi

银虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by DARKSEA2522 at 2012-03-19 09:20:16:
送花祝福,祝心情会好起来!

谢谢了!
准备跨新年!
15楼2012-03-19 13:34:56
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yj507

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qidannvzi: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-03-20 08:06:38
这个影响因素比较多哦
DNA纯度、起始量,
引物设计,
退火温度,
酶的选择,
或者dNTP浓度不小心使用过高了可能都会导致PCR没东西
16楼2012-03-19 16:00:37
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harbor2010

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qidannvzi: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-03-20 08:06:46
我们用的50ul的体系
上下游各1ul
Temple 1ul
17楼2012-03-19 16:35:40
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qidannvzi: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-03-20 08:06:56
西瓜: 金币+2, 鼓励应助!荧光定量太贵了,有点不划算哈~ 2012-03-20 11:56:33
建议你做个温度梯度PCR,同时对你的引物做下primer-blast验证引物特异性。如果还弄不出来,你仔细检查下步骤不会是跑胶忘加EB了吧?实在没结果的话你还可以做下荧光定量PCR,看看扩增曲线怎么样,这样可以实时监测你的PCR产物
18楼2012-03-19 22:33:35
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做PCR有时候还真的要看人品,祝你人品早点爆发
19楼2012-03-20 09:34:27
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-20 11:56:44
1 如果是引物的问题,那么你就要从设计的引物中筛选出扩增结果稳定,条带清晰,有多态性的引物
2 如果是PCR的条件问题,那么你就要看下退火温度是否合理,有没有需要加入Mg离子来提高反应的效率
3 如果是样品本身的问题,那么你说DNA是没有问题的,有DNA,但是能否确认标记上了,并且具有这种多态性,还有加样做PCR的时候是不是忘了加模板或者没加到体系里去?
20楼2012-03-20 09:41:46
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