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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么有的样品批不出来东西，DNA检测时挺好的啊
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qidannvzi

银虫 (正式写手)

[求助] 为什么有的样品批不出来东西，DNA检测时挺好的啊

金币全散了，因为我心情超不好，想把钱都花了买衣服，无奈太肥，还要减，还要吃饭。就把金币都花了，这也是我辛辛苦苦天天领的，很少灌水的，还有提心吊胆冒险领来的。我的问题是，我做SCOT的分子标记，DNA检测时，都挺好的，可是为什么PCR后用琼脂糖检测，有的样本一个条带也没有，我很郁闷，跑不出差异也就算了，还跑不出来条带，各位大侠中，有跑过分子标记，品种鉴定之类的，多提宝贵意见，没啥可回报的，就是有金币！
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准备跨新年！
1楼 2012-03-17 21:43:30
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-20 11:56:44
1 如果是引物的问题，那么你就要从设计的引物中筛选出扩增结果稳定，条带清晰，有多态性的引物
2 如果是PCR的条件问题，那么你就要看下退火温度是否合理，有没有需要加入Mg离子来提高反应的效率
3 如果是样品本身的问题，那么你说DNA是没有问题的，有DNA，但是能否确认标记上了，并且具有这种多态性，还有加样做PCR的时候是不是忘了加模板或者没加到体系里去？
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20楼2012-03-20 09:41:46
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水泗晶

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+5, ★有帮助 2012-03-19 08:16:44
可能是引物没有设计好，可能是PCR体系没有优化，可能是反应程序没有设定好，尤其是温度，退火温度或者延伸温度。你有做过梯度吗？连带都没有，marker带有吗？
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2楼2012-03-18 10:01:54
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yjb3344

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+30, ★★★很有帮助 2012-03-19 08:26:28
pcr产物没东西
牵扯的因素比较多
建议先把引物单独跑一跑 看引物的条带如何
其次 pcr反应的体系也很重要 （我一般用25ul体系，因人而异）
DNA 1ul
mix  12.5ul
引物 2ul 上下游总共
补足水
分子标记 循环设30个足够
退火温度很重要  引物单子会给出 一般是tm-10度
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不论在世界的任何角落·都要感到幸福
3楼2012-03-18 18:22:33
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a731705125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qidannvzi: 金币+10, ★★★很有帮助, 不是，我喜欢吃油泼面！ 2012-03-19 08:18:01
我们用的50ul的体系
上下游各1ul
Temple 1ul
等等
我今天有个pcr也没条带，打算再p一次试试，降低点退火温度。
还有楼主把头像换个呗，是不是想天天看到面条最后看到*心就不想再吃面条了么？
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4楼2012-03-18 19:45:11
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