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qidannvzi

银虫 (正式写手)

[求助] 为什么有的样品批不出来东西,DNA检测时挺好的啊

金币全散了,因为我心情超不好,想把钱都花了买衣服,无奈太肥,还要减,还要吃饭。就把金币都花了,这也是我辛辛苦苦天天领的,很少灌水的,还有提心吊胆冒险领来的。我的问题是,我做SCOT的分子标记,DNA检测时,都挺好的,可是为什么PCR后用琼脂糖检测,有的样本一个条带也没有,我很郁闷,跑不出差异也就算了,还跑不出来条带,各位大侠中,有跑过分子标记,品种鉴定之类的,多提宝贵意见,没啥可回报的,就是有金币!
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准备跨新年!
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yumijenny

木虫 (小有名气)

上面写错了,非特异性条带,不好意思
7楼2012-03-18 23:14:38
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水泗晶

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qidannvzi: 金币+5, 有帮助 2012-03-19 08:16:44
可能是引物没有设计好,可能是PCR体系没有优化,可能是反应程序没有设定好,尤其是温度,退火温度或者延伸温度。你有做过梯度吗?连带都没有,marker带有吗?
2楼2012-03-18 10:01:54
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yjb3344

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qidannvzi: 金币+30, ★★★很有帮助 2012-03-19 08:26:28
pcr产物没东西
牵扯的因素比较多
建议先把引物单独跑一跑 看引物的条带如何
其次 pcr反应的体系也很重要 (我一般用25ul体系,因人而异)
DNA 1ul
mix  12.5ul
引物 2ul 上下游总共
补足水
分子标记 循环设30个足够
退火温度很重要  引物单子会给出 一般是tm-10度
不论在世界的任何角落·都要感到幸福
3楼2012-03-18 18:22:33
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a731705125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qidannvzi: 金币+10, ★★★很有帮助, 不是,我喜欢吃油泼面! 2012-03-19 08:18:01
我们用的50ul的体系
上下游各1ul
Temple 1ul
等等
我今天有个pcr也没条带,打算再p一次试试,降低点退火温度。
还有楼主把头像换个呗,是不是想天天看到面条最后看到*心就不想再吃面条了么?
4楼2012-03-18 19:45:11
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