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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请高手看看我的PCR图片
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)

[求助] 请高手看看我的PCR图片 已有3人参与

DNA是我自己手提的，Marker最大的条带是1500bp的，PCR后的产物检测中没有检测到扩增的条带，总是检测出类似于基因组的片段，引物是特异性的，目的是扩增基因的一段，怎么会这样呢？
注：引物的退火温度是58.6，PCR扩增的时候是55°
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1楼 2011-12-19 20:37:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gaoyang636

木虫 (著名写手)
★
西瓜(金币+1): 对论坛规定很熟悉哦~不过都是小事一桩，大家都是互相帮助互相学习，善意的回复就不要太纠结了哈~ 2011-12-20 17:55:40
引用回帖:
8楼: Originally posted by 5xiaosh at 2011-12-20 11:23:56:
您好。我也想解决问题，精神上的支持不是应助吗？怎么规定的什么是水贴什么是应助贴呢？

精神上的支持就应该点选“不应助” ，请注意“确定回帖应助”后面的小字说明
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-12-20 17:14:38
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普通回帖

5xiaosh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
doudouxiong(金币+1): 共勉共勉 2011-12-20 10:07:03
也在做pcr  什么都没p出来的低手沉痛飘过
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2楼2011-12-19 20:57:52
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zjzws1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+3): 鼓励新虫友热情的应助，3金币奖励！ 2011-12-19 22:30:29
doudouxiong(金币+5): 2011-12-20 10:04:57
首先摸下梯度，如果梯度出了，你没扩出来那就是你模板的问题，如果摸梯度就什么都没出可以考虑如下思路：
重新设计引物，考虑目的片段长度换更适合的酶、
另外您说“注：引物的退火温度是58.6，PCR扩增的时候是55°”是啥意思？
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3楼2011-12-19 21:28:45
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
doudouxiong(金币+4): 2011-12-20 10:06:32
PCR条件还是不合适，换退火温度试试，还没条带就重设计引物。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2011-12-20 01:04:17
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 5xiaosh at 2011-12-19 20:57:52:
也在做pcr  什么都没p出来的低手沉痛飘过

像这种水帖，或者说同情帖，请不要选择“回帖应助”
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5楼2011-12-20 09:04:54
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by zjzws1 at 2011-12-19 21:28:45:
首先摸下梯度，如果梯度出了，你没扩出来那就是你模板的问题，如果摸梯度就什么都没出可以考虑如下思路：
重新设计引物，考虑目的片段长度换更适合的酶、
另外您说“注：引物的退火温度是58.6，PCR扩增的时候是 ...

做梯度的时候有的，可是再换模板的时候的确是扩不出来或者是就上述情况，现在导师不愿意换其他的提取DNA的方法什么的。那个温度的意思是引物订的时候说明书上的温度是58.6，我实际操作的时候感觉温度有点高，而且PCR梯度检测的时候55或者54也是条带还可以的。
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6楼2011-12-20 10:04:43
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by starseacow at 2011-12-20 01:04:17:
PCR条件还是不合适，换退火温度试试，还没条带就重设计引物。

大侠你说最上面的那个条带是模板吗？为什么我直接检测DNA没有这么亮的模板，反而是PCR以后却出现了，可以用这个来作为重新PCR的模板吗？
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7楼2011-12-20 10:06:27
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
西瓜: 这个倒是没有明文规定，不过一般的看法是对问题有贡献才选择“应助”。在求助帖发表纯表情的或无意义的回复，这种情况会被视为灌水。水贴浪费楼层，妨碍交流，所以在求助帖是不允许的。您的情况不算灌水，但是如果不是回答问题，下次请选择“不应助”。欢迎常来~ 2011-12-20 17:51:26
引用回帖:
5楼: Originally posted by gaoyang636 at 2011-12-20 09:04:54:
像这种水帖，或者说同情帖，请不要选择“回帖应助”

您好。我也想解决问题，精神上的支持不是应助吗？怎么规定的什么是水贴什么是应助贴呢？
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8楼2011-12-20 11:23:56
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jiying198509

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
doudouxiong(金币+3): 2011-12-21 16:43:22
应该先把你的DNA跑下电泳 看看是不是和这个结果一致 如果一致 建议重新设计引物
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9楼2011-12-20 13:16:29
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