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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
doudouxiong(金币+3): 2011-12-21 16:44:14
doudouxiong(金币+3): 2011-12-21 16:46:30
看扩增产物上面的条带大小，应该是基因组DNA。扩增不出来有可能是退火温度原因，也可能是扩增的那段本身就比较复杂，存在发夹结构之类的高级结构，换一下Buffer试一下。
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11楼2011-12-20 17:57:46
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zzjzheng

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
12楼2011-12-20 18:32:17
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by gaoyang636 at 2011-12-20 17:14:38:
精神上的支持就应该点选“不应助” ，请注意“确定回帖应助”后面的小字说明

奇了怪了，你怎么还管别人意志怎么的，我就点应助怎么了，况且楼主都发金币鼓励了，你凭神马打击人？我分子实验有可能比不上这里的好多虫虫，提不出神马一针见血的高见，还占了一楼，你就鸡蛋里挑骨头，欺负低手啊！谁生下来就是高手啊，爷爷还是从孙子过来的，你不知道吗？只许官州放火，不许百姓点灯。在说你点应助，就真的能帮助楼主解决问题吗？点应助的你敢说有说的都是对的吗？难道你能让那些说的不对的都闭嘴吗？神马的，真气人！！
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13楼2011-12-20 19:15:58
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
doudouxiong(金币+3): 2011-12-21 16:48:34
doudouxiong(金币+3): 2011-12-21 16:50:35
如果电泳检测DNA没有问题 很可能是你PCR模板弄度高 模板弄度太高，模板之间会与引物竞争结合，PCR会P出来
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14楼2011-12-20 20:44:31
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by joan198108 at 2011-12-20 17:57:46:
看扩增产物上面的条带大小，应该是基因组DNA。扩增不出来有可能是退火温度原因，也可能是扩增的那段本身就比较复杂，存在发夹结构之类的高级结构，换一下Buffer试一下。

直接提取的DNA我检测的时候都没有这么亮的条带，可是PCR后为什么会出现这样的情况呢？还有，很喜欢你的头像~
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15楼2011-12-21 16:45:18
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by zzjzheng at 2011-12-20 18:32:17:
你做的应该是模板浓度梯度吧，既然做梯度的时候有，那就继续用那个浓度做模板不就行了吗，温度也不一定药按照引物设计说明书上来，也可以做温度梯度，我有时候做PCR跟设计说明书上相差就挺大的……如果是植物或真 ...

我做的是温度梯度，可是一换模板之前的那个温度就不行了，怀疑是模板的问题，可是CTAB法提取的DNA，可以用其他什么方法来纯化一下呢？
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16楼2011-12-21 16:47:55
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doudouxiong

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by syn1985 at 2011-12-20 20:44:31:
如果电泳检测DNA没有问题 很可能是你PCR模板弄度高 模板弄度太高，模板之间会与引物竞争结合，PCR会P出来

大侠你说要是模板里有蛋白质等杂志会不会导致P不出来，或者是有木有什么比较好的方法能纯化一下，我的DNA样品真的是很少，不过之前检测的效果也不是很好，现在怀疑是模板的问题，貌似被蛋白质等污染了
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17楼2011-12-21 16:50:28
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by doudouxiong at 2011-12-21 16:50:28:
大侠你说要是模板里有蛋白质等杂志会不会导致P不出来，或者是有木有什么比较好的方法能纯化一下，我的DNA样品真的是很少，不过之前检测的效果也不是很好，现在怀疑是模板的问题，貌似被蛋白质等污染了

会的，不过你说你DNA样品量低，不知道你这是电泳检测的还是测OD的，如果你样品浓度低，你怎么会PCR结果里面有基因组呢？你对你的DNA浓度做过精确的测定吗？
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18楼2011-12-21 17:13:56
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无名—小卒
19楼2011-12-21 17:27:38
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songwang0516

银虫 (初入文坛)
新手，支持楼主。
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20楼2012-07-26 09:57:18
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