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doudouxiong

铜虫 (小有名气)

[求助] 请高手看看我的PCR图片 已有3人参与

DNA是我自己手提的,Marker最大的条带是1500bp的,PCR后的产物检测中没有检测到扩增的条带,总是检测出类似于基因组的片段,引物是特异性的,目的是扩增基因的一段,怎么会这样呢?
注:引物的退火温度是58.6,PCR扩增的时候是55°
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jiying198509

新虫 (初入文坛)

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doudouxiong(金币+3): 2011-12-21 16:43:22
应该先把你的DNA跑下电泳 看看是不是和这个结果一致 如果一致 建议重新设计引物
9楼2011-12-20 13:16:29
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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doudouxiong(金币+1): 共勉共勉 2011-12-20 10:07:03
也在做pcr  什么都没p出来的低手沉痛飘过
2楼2011-12-19 20:57:52
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zjzws1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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wanhscn(金币+3): 鼓励新虫友热情的应助,3金币奖励! 2011-12-19 22:30:29
doudouxiong(金币+5): 2011-12-20 10:04:57
首先摸下梯度,如果梯度出了,你没扩出来那就是你模板的问题,如果摸梯度就什么都没出可以考虑如下思路:
重新设计引物,考虑目的片段长度换更适合的酶、
另外您说“注:引物的退火温度是58.6,PCR扩增的时候是55°”是啥意思?
3楼2011-12-19 21:28:45
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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doudouxiong(金币+4): 2011-12-20 10:06:32
PCR条件还是不合适,换退火温度试试,还没条带就重设计引物。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2011-12-20 01:04:17
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