24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3596  |  回复: 28

doudouxiong

铜虫 (小有名气)

[求助] 请高手看看我的PCR图片 已有3人参与

DNA是我自己手提的,Marker最大的条带是1500bp的,PCR后的产物检测中没有检测到扩增的条带,总是检测出类似于基因组的片段,引物是特异性的,目的是扩增基因的一段,怎么会这样呢?
注:引物的退火温度是58.6,PCR扩增的时候是55°
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gaoyang636

木虫 (著名写手)


西瓜(金币+1): 对论坛规定很熟悉哦~不过都是小事一桩,大家都是互相帮助互相学习,善意的回复就不要太纠结了哈~ 2011-12-20 17:55:40
引用回帖:
8楼: Originally posted by 5xiaosh at 2011-12-20 11:23:56:
您好。我也想解决问题,精神上的支持不是应助吗?怎么规定的什么是水贴什么是应助贴呢?

精神上的支持就应该点选“不应助” ,请注意“确定回帖应助”后面的小字说明
10楼2011-12-20 17:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

5xiaosh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
doudouxiong(金币+1): 共勉共勉 2011-12-20 10:07:03
也在做pcr  什么都没p出来的低手沉痛飘过
2楼2011-12-19 20:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjzws1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wanhscn(金币+3): 鼓励新虫友热情的应助,3金币奖励! 2011-12-19 22:30:29
doudouxiong(金币+5): 2011-12-20 10:04:57
首先摸下梯度,如果梯度出了,你没扩出来那就是你模板的问题,如果摸梯度就什么都没出可以考虑如下思路:
重新设计引物,考虑目的片段长度换更适合的酶、
另外您说“注:引物的退火温度是58.6,PCR扩增的时候是55°”是啥意思?
3楼2011-12-19 21:28:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
doudouxiong(金币+4): 2011-12-20 10:06:32
PCR条件还是不合适,换退火温度试试,还没条带就重设计引物。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2011-12-20 01:04:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 5xiaosh at 2011-12-19 20:57:52:
也在做pcr  什么都没p出来的低手沉痛飘过

像这种水帖,或者说同情帖,请不要选择“回帖应助”
5楼2011-12-20 09:04:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doudouxiong

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by zjzws1 at 2011-12-19 21:28:45:
首先摸下梯度,如果梯度出了,你没扩出来那就是你模板的问题,如果摸梯度就什么都没出可以考虑如下思路:
重新设计引物,考虑目的片段长度换更适合的酶、
另外您说“注:引物的退火温度是58.6,PCR扩增的时候是 ...

做梯度的时候有的,可是再换模板的时候的确是扩不出来或者是就上述情况,现在导师不愿意换其他的提取DNA的方法什么的。那个温度的意思是引物订的时候说明书上的温度是58.6,我实际操作的时候感觉温度有点高,而且PCR梯度检测的时候55或者54也是条带还可以的。
6楼2011-12-20 10:04:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doudouxiong

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by starseacow at 2011-12-20 01:04:17:
PCR条件还是不合适,换退火温度试试,还没条带就重设计引物。

大侠你说最上面的那个条带是模板吗?为什么我直接检测DNA没有这么亮的模板,反而是PCR以后却出现了,可以用这个来作为重新PCR的模板吗?
7楼2011-12-20 10:06:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

5xiaosh

银虫 (小有名气)

西瓜: 这个倒是没有明文规定,不过一般的看法是对问题有贡献才选择“应助”。在求助帖发表纯表情的或无意义的回复,这种情况会被视为灌水。水贴浪费楼层,妨碍交流,所以在求助帖是不允许的。您的情况不算灌水,但是如果不是回答问题,下次请选择“不应助”。欢迎常来~ 2011-12-20 17:51:26
引用回帖:
5楼: Originally posted by gaoyang636 at 2011-12-20 09:04:54:
像这种水帖,或者说同情帖,请不要选择“回帖应助”

您好。我也想解决问题,精神上的支持不是应助吗?怎么规定的什么是水贴什么是应助贴呢?
8楼2011-12-20 11:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiying198509

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
doudouxiong(金币+3): 2011-12-21 16:43:22
应该先把你的DNA跑下电泳 看看是不是和这个结果一致 如果一致 建议重新设计引物
9楼2011-12-20 13:16:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 doudouxiong 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上和省基金B类撒花 +14 花田半亩~白 2026-04-21 14/700 2026-04-22 21:36 by sw_as1234
[考研] 有没有学校收留 +3 蒋昌鹏qtj 2026-04-20 3/150 2026-04-22 20:25 by 学员JpLReM
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
信息提示
请填处理意见