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【求助/交流】pcr p不出特异性条带 已有12人参与
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我最近做的pcr 目的片段是1194，做了三次pcr 分别用59 61 63度的退火温度，在62度是能p出来条带，但是非特异性条带很多，提高到63度是出现一条大约在800bp的条带 ，不知道是怎么回事 模板 1 引物 1 1 酶 0.5 水 23 buffer 3 dNTP 1 这是体现，请教大家了 |
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2楼2010-08-25 11:49:29
3楼2010-08-25 12:14:24
怎么都行
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对于你说的情况，62度能扩增而63度只扩出一条非目的带，我猜你可以用touch down PCR试试，退火温度由65度降落到60度， 每循环降落0.5度，10个循环，后20个循环用60度退火。 还有，你的引物设计出来后有没有BLAST比对过，说不定该对引物能跟该物种基因组的其他位置更易结合引发。 还有一个可能，你设计的这段引物在该物种基因组的变异热点区域，存在序列deletion等变异方式，你用作引物设计的模板序列在该区域长度是1194，但你做的那个生物株系或许就只有800bp左右也说不定。 |
4楼2010-08-25 12:31:26
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8楼2010-08-25 20:33:22
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