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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR总是做不出来，请帮忙分析下原因
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

[交流] 【求助/交流】PCR总是做不出来，请帮忙分析下原因 已有10人参与

我是做泥鳅的foxl2基因扩增，刚开始是试的退火温度，后来一直没有做出来，就做梯度58加减5°，还是做不出来……老师说可能是酶的问题，也可能是引物的问题……

现在是没有时间再做了，一直没有做出结果，马上论文答辩，就分析下原因，希望大家可以帮帮忙。以下是我1.2%琼脂糖胶电泳后的图片


  
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就这么熬着，什么时候是个头……
1楼 2010-05-17 15:14:23
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忘记将来

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
个人观点：胶貌似也不好，marker跑的也不好，如果酶放了很久可能是酶的问题，因素比较多，这个不好说
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2楼2010-05-17 16:36:38
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
原因真的太多了，酶，引物，反应条件，，，
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3楼2010-05-17 16:39:41
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by 忘记将来 at 2010-05-17 16:36:38:
个人观点：胶貌似也不好，marker跑的也不好，如果酶放了很久可能是酶的问题，因素比较多，这个不好说

那个marker都是放了不知道多久的，我都是试试看是不是好的，所以点了四个，酶老师说可能有问题，说买的时候再收发室放了几天哦，胶好不好怎么看？
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就这么熬着，什么时候是个头……
4楼2010-05-17 16:41:02
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流 2010-05-17 17:30:43
原因可能：1、点样没点好，或者电泳过程没控制好，看你的Marker都没跑好。
               2、PCR尽管有许多影响因素，但许多影响因子都是影响量上的差别，主要                 的影响条件有：Tm、引物、酶。
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望大家都各有所获！
5楼2010-05-17 17:18:49
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hitliutao

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个图像都没有聚焦.连MARKER也托带,该换新的电泳液了,而且你用的agrose 一定要选质量好的.
至于PCR没有扩出来,原因太多了,最大的原因就是酶.其次是引物,再次是退火温度,最后是模板.你挨个分析原因吧,祝好运
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6楼2010-05-17 18:30:42
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寡人VS朕

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看你照，四种marker都没跑好，有可能是胶的质量不好。电泳液、酶等也可能有问题。
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Fighting！
7楼2010-05-17 19:00:56
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mxx86

金虫 (职业作家)

快乐家族--心飞
★
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引物都没带啊 应该是引物问题
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慢慢走过 蓦然回首 才发现大家都走丢了 人生就是这样吗
8楼2010-05-17 19:03:38
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
marker都没泡好啊！！！我建议你用商品化的PCR mix做一个梯度PCR，然后也就尽可能的排出其他的因素，如果还做不出来，就重新设计引物
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
9楼2010-05-17 19:06:19
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哈比纳兹

新虫 (初入文坛)
★
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我刚开始做的时候也出现过这样的情况，Marker都跑的很奇怪，你核酸染料的量加的是不是太少？或者没有混好导致胶铺的不好！
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10楼2010-05-17 19:12:54
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