应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR总是做不出来，请帮忙分析下原因
131/2返回列表12下一页
查看: 1898  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

[交流] 【求助/交流】PCR总是做不出来，请帮忙分析下原因 已有10人参与

我是做泥鳅的foxl2基因扩增，刚开始是试的退火温度，后来一直没有做出来，就做梯度58加减5°，还是做不出来……老师说可能是酶的问题，也可能是引物的问题……

现在是没有时间再做了，一直没有做出结果，马上论文答辩，就分析下原因，希望大家可以帮帮忙。以下是我1.2%琼脂糖胶电泳后的图片


  
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
就这么熬着，什么时候是个头……
1楼 2010-05-17 15:14:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘记将来

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
个人观点：胶貌似也不好，marker跑的也不好，如果酶放了很久可能是酶的问题，因素比较多，这个不好说
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-05-17 16:36:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
原因真的太多了，酶，引物，反应条件，，，
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-17 16:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by 忘记将来 at 2010-05-17 16:36:38:
个人观点：胶貌似也不好，marker跑的也不好，如果酶放了很久可能是酶的问题，因素比较多，这个不好说

那个marker都是放了不知道多久的，我都是试试看是不是好的，所以点了四个，酶老师说可能有问题，说买的时候再收发室放了几天哦，胶好不好怎么看？
赞一下 回复此楼
就这么熬着，什么时候是个头……
4楼2010-05-17 16:41:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyg7720349

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流 2010-05-17 17:30:43
原因可能：1、点样没点好，或者电泳过程没控制好，看你的Marker都没跑好。
               2、PCR尽管有许多影响因素，但许多影响因子都是影响量上的差别，主要                 的影响条件有：Tm、引物、酶。
赞一下(2人) 回复此楼
望大家都各有所获！
5楼2010-05-17 17:18:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hitliutao

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个图像都没有聚焦.连MARKER也托带,该换新的电泳液了,而且你用的agrose 一定要选质量好的.
至于PCR没有扩出来,原因太多了,最大的原因就是酶.其次是引物,再次是退火温度,最后是模板.你挨个分析原因吧,祝好运
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-05-17 18:30:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寡人VS朕

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看你照，四种marker都没跑好，有可能是胶的质量不好。电泳液、酶等也可能有问题。
赞一下(1人) 回复此楼
Fighting！
7楼2010-05-17 19:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mxx86

金虫 (职业作家)

快乐家族--心飞
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物都没带啊 应该是引物问题
赞一下(1人) 回复此楼
慢慢走过 蓦然回首 才发现大家都走丢了 人生就是这样吗
8楼2010-05-17 19:03:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
marker都没泡好啊！！！我建议你用商品化的PCR mix做一个梯度PCR，然后也就尽可能的排出其他的因素，如果还做不出来，就重新设计引物
赞一下(1人) 回复此楼
将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
9楼2010-05-17 19:06:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哈比纳兹

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我刚开始做的时候也出现过这样的情况，Marker都跑的很奇怪，你核酸染料的量加的是不是太少？或者没有混好导致胶铺的不好！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-05-17 19:12:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 邓娟 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭