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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

[交流] 【求助/交流】PCR总是做不出来,请帮忙分析下原因 已有10人参与

我是做泥鳅的foxl2基因扩增,刚开始是试的退火温度,后来一直没有做出来,就做梯度58加减5°,还是做不出来……老师说可能是酶的问题,也可能是引物的问题……

现在是没有时间再做了,一直没有做出结果,马上论文答辩,就分析下原因,希望大家可以帮帮忙。以下是我1.2%琼脂糖胶电泳后的图片


  
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就这么熬着,什么时候是个头……
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jasco

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
原因真的太多了,酶,引物,反应条件,,,
3楼2010-05-17 16:39:41
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忘记将来

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
个人观点:胶貌似也不好,marker跑的也不好,如果酶放了很久可能是酶的问题,因素比较多,这个不好说
2楼2010-05-17 16:36:38
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

引用回帖:
Originally posted by 忘记将来 at 2010-05-17 16:36:38:
个人观点:胶貌似也不好,marker跑的也不好,如果酶放了很久可能是酶的问题,因素比较多,这个不好说

那个marker都是放了不知道多久的,我都是试试看是不是好的,所以点了四个,酶老师说可能有问题,说买的时候再收发室放了几天哦,胶好不好怎么看?
就这么熬着,什么时候是个头……
4楼2010-05-17 16:41:02
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流 2010-05-17 17:30:43
原因可能:1、点样没点好,或者电泳过程没控制好,看你的Marker都没跑好。
               2、PCR尽管有许多影响因素,但许多影响因子都是影响量上的差别,主要                 的影响条件有:Tm、引物、酶。
望大家都各有所获!
5楼2010-05-17 17:18:49
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