应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增不出目的条带
131/2返回列表12下一页
查看: 2875  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

深蓝色竹子

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增不出目的条带

我是用cDNA为模板（已经确定没问题），进行扩增1500bp的基因，都换了两次引物了，每次都会在500bp左右扩增出很亮的条带，阴性对照也有这条带，但是目的条带几乎木有，都一个月了，就是扩增不出来，请各位给予指导

dell 2013-01-15 18hr 38min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-24 19:44:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
所有试剂换新的，把水好好灭菌
赞一下(1人) 回复此楼
毕业回望科研路，满目疮痍一身土
8楼2013-01-26 22:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

深蓝色竹子

新虫 (小有名气)
我用的是5000Maker，大小一次为5000,3000,2000,1000,750,500，250，100，我用的是高保真的酶，Mix也用过同样的情况！
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-24 19:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换用GC rich buffer试一试，可能是产物GC含量高
另外，你有不止一对引物，可以尝试巢氏PCR
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-24 20:12:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

深蓝色竹子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yesali at 2013-01-24 20:12:23
换用GC rich buffer试一试，可能是产物GC含量高
另外，你有不止一对引物，可以尝试巢氏PCR

我是扩增的全长，要做表达的，但是我的目的记忆总的GC含量才43%，应该不算太高吧
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-24 21:43:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

总的GC含量不高，但是不排除某一个区域GC含量高，PCR到这个区域后可能延伸不下去
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-25 09:03:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，如何确定cDNA没有问题？
最大的可能就是引物没设计好，请再提高退火温度试试或者减少引物的量，你的所有样品扩增都是smear，如果还不行，请重新设计引物。
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-25 10:39:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我个人觉得是你的引物的问题，引物设计得不是很好，可以提高退火温度去跑试试看，实在不行重新设计引物吧！
赞一下 回复此楼
7楼2013-01-25 11:48:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

木--林--森

铜虫 (小有名气)
我今天的PCR扩增也失败了，找不出原因！
赞一下 回复此楼
没有什么了不起的！
9楼2013-01-28 00:26:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dkyy970111

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

实在不行换一步法RT-PCR试剂盒。
赞一下 回复此楼
打铁还要自身硬
10楼2013-01-28 16:01:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 深蓝色竹子 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭