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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带
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cdl007

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议你增加变性时间，因为基因组很长，不能充分变性的话p的就不好

热启动PCR可以尝试一下
就是第一步充分变性后再加入Taq酶
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31楼2010-09-09 16:04:45
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张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang
[quote]Originally posted by cdl007 at 2010-09-09 16:04:45:
建议你增加变性时间，因为基因组很长，不能充分变性的话p的就不好

热启动PCR可以尝试一下
就是第一步充分变性后再加入Taq酶 [/quo



是这样的，热启动，变性10分钟
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每天进步一点点，持之以恒！
32楼2010-09-09 20:07:41
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kaixin179

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我认为：会不会是属于高GC含量的模板导致这些，建议用高GCbuffer！
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生物必成朝阳产业，甘做拓荒牛！
33楼2010-09-09 22:10:40
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285459331

铁虫 (小有名气)
一般都是基因组的问题。
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生命不止，奋斗不息
34楼2010-09-09 22:58:09
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):yes 2010-09-10 11:48:04
赞同试一下GCbuffer
另阳性对照很重要，no control，no result。
有了对照才可以排除一些因素，才能更好能明问题
赞一下(3人) 回复此楼
终于熬成木虫了……
35楼2010-09-10 03:08:11
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张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang
引用回帖:
Originally posted by zjzz at 2010-09-10 03:08:11:
赞同试一下GCbuffer
另阳性对照很重要，no control，no result。
有了对照才可以排除一些因素，才能更好能明问题

GC buffer  1和2都用过了
赞一下 回复此楼
每天进步一点点，持之以恒！
36楼2010-09-10 08:49:53
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
2.2K也不大啊，没有阳性对照哈。那么试一下nest PCR吧。
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37楼2010-09-10 09:58:28
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vickie20

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1963009楼: Originally posted by diana0423 at 2010-08-27 19:51:41
试下加点二甲亚砜

二甲基亚砜加的量要多少呢？
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38楼2012-06-24 11:22:02
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vickie20

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2245737楼: Originally posted by 张学涛50 at 2010-09-07 18:40:37
可以尝试加点BSA
把模板稀释一下

加BSA是为什么呢？
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39楼2012-06-24 11:24:47
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fukui5282000

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
稀释下模版吧，之前我做的时候也是，后来稀释了几次在做就亮了
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40楼2012-06-25 16:47:05
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