【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带 - 分子生物 - 综合其他

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cdl007

木虫 (正式写手)

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★
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建议你增加变性时间，因为基因组很长，不能充分变性的话p的就不好

热启动PCR可以尝试一下
就是第一步充分变性后再加入Taq酶

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31楼2010-09-09 16:04:45

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张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

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[quote]Originally posted by cdl007 at 2010-09-09 16:04:45:
建议你增加变性时间，因为基因组很长，不能充分变性的话p的就不好

热启动PCR可以尝试一下
就是第一步充分变性后再加入Taq酶 [/quo

是这样的，热启动，变性10分钟

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每天进步一点点，持之以恒！

32楼2010-09-09 20:07:41

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kaixin179

金虫 (小有名气)

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★
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我认为：会不会是属于高GC含量的模板导致这些，建议用高GCbuffer！

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生物必成朝阳产业，甘做拓荒牛！

33楼2010-09-09 22:10:40

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285459331

铁虫 (小有名气)

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一般都是基因组的问题。

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生命不止，奋斗不息

34楼2010-09-09 22:58:09

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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上

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silicare(金币+1):yes 2010-09-10 11:48:04

赞同试一下GCbuffer
另阳性对照很重要，no control，no result。
有了对照才可以排除一些因素，才能更好能明问题

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终于熬成木虫了……

35楼2010-09-10 03:08:11

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张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

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引用回帖:

Originally posted by zjzz at 2010-09-10 03:08:11:
赞同试一下GCbuffer
另阳性对照很重要，no control，no result。
有了对照才可以排除一些因素，才能更好能明问题

GC buffer 1和2都用过了

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每天进步一点点，持之以恒！

36楼2010-09-10 08:49:53

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linxi8579

铜虫 (正式写手)

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2.2K也不大啊，没有阳性对照哈。那么试一下nest PCR吧。

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37楼2010-09-10 09:58:28

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vickie20

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引用回帖:

1963009楼: Originally posted by diana0423 at 2010-08-27 19:51:41
试下加点二甲亚砜

二甲基亚砜加的量要多少呢？

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38楼2012-06-24 11:22:02

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vickie20

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

2245737楼: Originally posted by 张学涛50 at 2010-09-07 18:40:37
可以尝试加点BSA
把模板稀释一下

加BSA是为什么呢？

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39楼2012-06-24 11:24:47

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fukui5282000

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稀释下模版吧，之前我做的时候也是，后来稀释了几次在做就亮了

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40楼2012-06-25 16:47:05

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