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张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

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[交流] 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带已有27人参与

模板用基因组DNA，引物碱基数25，GC含量为64和56，Tm值为68.54和65.26
目的带约2.2K
我试过退火温度58 60 63 65 66 68
酶试过rTaq ExTaq 还有高保真酶
buffer也换过几种

大多数时候出现引物二聚体，有时出现估计几十K但很弱的条带（接近上样孔的地方），有时什么都没

很郁闷，很无助

问题在哪里呀？

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每天进步一点点，持之以恒！

1楼 2010-08-27 10:26:31

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285459331

铁虫 (小有名气)

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一般都是基因组的问题。

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生命不止，奋斗不息

34楼2010-09-09 22:58:09

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sqhnsd

金虫 (正式写手)

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★
张晓梅ZXM(金币+1):谢谢参与
张晓梅ZXM(金币+1): 2010-08-27 16:40:14

引用回帖:

Originally posted by 张晓梅ZXM at 2010-08-27 10:26:31:
模板用基因组DNA，引物碱基数25，GC含量为64和56，Tm值为68.54和65.26
目的带约2.2K
我试过退火温度58 60 63 65 66 68
酶试过rTaq ExTaq 还有高保真酶
buffer也换过几种

大多数时候出现引物二聚体 ...

可能引物设计失败。还有你要保证你的体系能扩出东西来，你的基因组质量是好的。

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2楼2010-08-27 12:00:09

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