24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang

应助: 3 (幼儿园)
金币: 5321.6
散金: 22
红花: 2
帖子: 420
在线: 147.3小时
虫号: 848646
注册: 2009-09-15
性别: MM
专业: 微生物资源与分类学

[交流] 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带已有27人参与

模板用基因组DNA，引物碱基数25，GC含量为64和56，Tm值为68.54和65.26
目的带约2.2K
我试过退火温度58 60 63 65 66 68
酶试过rTaq ExTaq 还有高保真酶
buffer也换过几种

大多数时候出现引物二聚体，有时出现估计几十K但很弱的条带（接近上样孔的地方），有时什么都没

很郁闷，很无助

问题在哪里呀？

回复此楼

» 猜你喜欢

每天进步一点点，持之以恒！

1楼 2010-08-27 10:26:31

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

fukui5282000

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 613.2
帖子: 65
在线: 54.2小时
虫号: 1652540
注册: 2012-02-29
性别: MM
专业: 环境污染化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

稀释下模版吧，之前我做的时候也是，后来稀释了几次在做就亮了

赞一下

回复此楼

40楼2012-06-25 16:47:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 40 个回答

sqhnsd

金虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 515.3
散金: 100
帖子: 412
在线: 56.9小时
虫号: 1045397
注册: 2010-06-22
性别: GG
专业: 蛋白质组学

★
张晓梅ZXM(金币+1):谢谢参与
张晓梅ZXM(金币+1): 2010-08-27 16:40:14

引用回帖:

Originally posted by 张晓梅ZXM at 2010-08-27 10:26:31:
模板用基因组DNA，引物碱基数25，GC含量为64和56，Tm值为68.54和65.26
目的带约2.2K
我试过退火温度58 60 63 65 66 68
酶试过rTaq ExTaq 还有高保真酶
buffer也换过几种

大多数时候出现引物二聚体 ...

可能引物设计失败。还有你要保证你的体系能扩出东西来，你的基因组质量是好的。

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2010-08-27 12:00:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖