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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带
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张晓梅ZXM

金虫 (正式写手)

meimeizhang
引用回帖:
Originally posted by lfkey at 2010-08-27 16:32:23:
温度太低特异性会减弱，我觉得不能低于60度，引物可以少加点，另外摸索退火温度时间隔可以再小点；重新设计引物到可以考虑一下。检测能否扩增出条带的话，我觉得应该没有酶或者buffer的事。

谢谢建议！我再努力试试，老师也说我这个基因本身就不好做~~
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每天进步一点点，持之以恒！
11楼2010-08-31 10:34:12
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kangkang997

金虫 (小有名气)
延长时间是多少啊？
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12楼2010-09-06 15:34:45
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用试剂盒提取基因组DNA,用最普通的Taq酶扩一次试试，如果不行的话，估计就是引物的问题了
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天道酬勤
13楼2010-09-07 10:34:02
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liyan66007

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物二聚体出现比较正常，样品靠近点样孔可能是浓度太高
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14楼2010-09-07 12:33:05
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的退火温度可以再降降，同时换对引物确保基因组没问题，然后就是引物的问题了
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一直向前！
15楼2010-09-07 12:49:48
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板的问题，
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16楼2010-09-07 16:06:28
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qingzi8575

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火温度到53 55度试试，我所有的基因基本都用这个温度退火，特异性也不错
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17楼2010-09-07 16:22:03
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张学涛50

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以尝试加点BSA
把模板稀释一下
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18楼2010-09-07 18:40:37
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主还是换对引物看看吧！
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jiayoubashaonian
19楼2010-09-07 19:28:37
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物设计有问题
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20楼2010-09-07 20:12:23
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