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liuqingrui5

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[求助] 为什么同样的PCR条件结果重复不出来呢，P出来一次之后就P不出来了已有10人参与

为什么同样的PCR条件结果重复不出来呢，P出来一次之后就P不出来了，重复了好几次都不行，超级郁闷

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请教各位前辈为什么我做菌落PCR总也P不出来已经有28人回复

1楼 2013-12-30 20:34:45

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liuqingrui5

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引用回帖:

2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-12-30 20:45:16
小概率事件罢了
别灰心。。。。。。。。。

重复了5次了都重复不出来

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3楼2013-12-30 20:48:35

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luwei13566

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:46:22

引用回帖:

7楼: Originally posted by liuqingrui5 at 2013-12-30 21:04:49
我就是用的最普通的taq酶(rTaq),这种酶扩增出来的产物错误率会不会比较高，如果再以PCR产物为模板会不会得到的序列和真实序列不一致？...

这得看你的需要扩增的基因大小了，不过rTaq确实保真性不高，不建议你用PCR产物做模板P，很有可能就把突变片段给放大了，不过你现在关键是P都P不出来了，用你P的产物来做模板，其他条件和以前P的一样，这实际就是验证你P不出来条带是不是模板的问题~如果你用PCR产物P出来而用原来的模板P不出来那就说明你原来的模板可能出问题啦~并不一定是让你回收连T载体的

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