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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么同样的PCR条件结果重复不出来呢，P出来一次之后就P不出来了
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liuqingrui5

金虫 (小有名气)

[求助] 为什么同样的PCR条件结果重复不出来呢，P出来一次之后就P不出来了 已有10人参与

为什么同样的PCR条件结果重复不出来呢，P出来一次之后就P不出来了，重复了好几次都不行，超级郁闷
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1楼 2013-12-30 20:34:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liuqingrui5

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-12-30 20:45:16
小概率事件罢了
别灰心。。。。。。。。。

重复了5次了都重复不出来
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3楼2013-12-30 20:48:35
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:46:22
引用回帖:
7楼: Originally posted by liuqingrui5 at 2013-12-30 21:04:49
我就是用的最普通的taq酶(rTaq),这种酶扩增出来的产物错误率会不会比较高，如果再以PCR产物为模板会不会得到的序列和真实序列不一致？...

这得看你的需要扩增的基因大小了，不过rTaq确实保真性不高，不建议你用PCR产物做模板P，很有可能就把突变片段给放大了，不过你现在关键是P都P不出来了，用你P的产物来做模板，其他条件和以前P的一样，这实际就是验证你P不出来条带是不是模板的问题~如果你用PCR产物P出来而用原来的模板P不出来那就说明你原来的模板可能出问题啦~并不一定是让你回收连T载体的
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liuqingrui5
大家相互帮助哈
11楼2013-12-30 21:50:45
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纤纤陌上尘

木虫 (小有名气)
请问楼主后来是怎么解决的，我也遇到了同样的问题，现在各种做对照找原因，还没找到
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21楼2014-09-24 17:06:44
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普通回帖

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小概率事件罢了
别灰心。。。。。。。。。
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liuqingrui5
2楼2013-12-30 20:45:16
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

你就把你已经p出来的东西当成模板，再p一次

或者   换个pcr做做看
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liuqingrui5
4楼2013-12-30 20:51:14
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liuqingrui5

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yang0071 at 2013-12-30 20:51:14
你就把你已经p出来的东西当成模板，再p一次

或者   换个pcr做做看

我用的Taq酶，保真性不高，如果用pcr产物做模板，会不会有错误序列？
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5楼2013-12-30 20:53:54
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:45:50
换taq酶，特别是一些easy taq mix ，只是适合于普通的pcr。如果引物需要的条件比较苛刻，那么建议你用LA或者Ex的酶。
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liuqingrui5
我不会！
6楼2013-12-30 21:00:39
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liuqingrui5

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-12-30 21:00:39
换taq酶，特别是一些easy taq mix ，只是适合于普通的pcr。如果引物需要的条件比较苛刻，那么建议你用LA或者Ex的酶。

我就是用的最普通的taq酶(rTaq),这种酶扩增出来的产物错误率会不会比较高，如果再以PCR产物为模板会不会得到的序列和真实序列不一致？
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7楼2013-12-30 21:04:49
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mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:45:57
换 Iproof 试试，经常用这个，感觉不错。实验做多了，总会碰到千奇百怪的问题，哈哈...
好运
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Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.
8楼2013-12-30 21:20:46
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guanfeifei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:46:04
我也是只有taq酶的，偶尔有一次P出来就像中奖似的。。。真让人发疯，好好总结经验，唉！

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liuqingrui5
9楼2013-12-30 21:38:58
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shefu1204

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
图位克隆是遇到过这种问题，可能是引物设计问题
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10楼2013-12-30 21:48:41
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