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liuqingrui5

金虫 (小有名气)

[求助] 为什么同样的PCR条件结果重复不出来呢,P出来一次之后就P不出来了 已有10人参与

为什么同样的PCR条件结果重复不出来呢,P出来一次之后就P不出来了,重复了好几次都不行,超级郁闷
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liuqingrui5

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-12-30 20:45:16
小概率事件罢了
别灰心。。。。。。。。。

重复了5次了都重复不出来
3楼2013-12-30 20:48:35
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-31 00:46:22
引用回帖:
7楼: Originally posted by liuqingrui5 at 2013-12-30 21:04:49
我就是用的最普通的taq酶(rTaq),这种酶扩增出来的产物错误率会不会比较高,如果再以PCR产物为模板会不会得到的序列和真实序列不一致?...

这得看你的需要扩增的基因大小了,不过rTaq确实保真性不高,不建议你用PCR产物做模板P,很有可能就把突变片段给放大了,不过你现在关键是P都P不出来了,用你P的产物来做模板,其他条件和以前P的一样,这实际就是验证你P不出来条带是不是模板的问题~如果你用PCR产物P出来而用原来的模板P不出来那就说明你原来的模板可能出问题啦~并不一定是让你回收连T载体的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

大家相互帮助哈
11楼2013-12-30 21:50:45
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纤纤陌上尘

木虫 (小有名气)

请问楼主后来是怎么解决的,我也遇到了同样的问题,现在各种做对照找原因,还没找到
21楼2014-09-24 17:06:44
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普通回帖

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小概率事件罢了
别灰心。。。。。。。。。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-12-30 20:45:16
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

你就把你已经p出来的东西当成模板,再p一次

或者   换个pcr做做看

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-12-30 20:51:14
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liuqingrui5

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yang0071 at 2013-12-30 20:51:14
你就把你已经p出来的东西当成模板,再p一次

或者   换个pcr做做看

我用的Taq酶,保真性不高,如果用pcr产物做模板,会不会有错误序列?
5楼2013-12-30 20:53:54
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-31 00:45:50
换taq酶,特别是一些easy taq mix ,只是适合于普通的pcr。如果引物需要的条件比较苛刻,那么建议你用LA或者Ex的酶。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

我不会!
6楼2013-12-30 21:00:39
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liuqingrui5

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-12-30 21:00:39
换taq酶,特别是一些easy taq mix ,只是适合于普通的pcr。如果引物需要的条件比较苛刻,那么建议你用LA或者Ex的酶。

我就是用的最普通的taq酶(rTaq),这种酶扩增出来的产物错误率会不会比较高,如果再以PCR产物为模板会不会得到的序列和真实序列不一致?
7楼2013-12-30 21:04:49
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mjt2007

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-31 00:45:57
换 Iproof 试试,经常用这个,感觉不错。实验做多了,总会碰到千奇百怪的问题,哈哈...
好运
Theworldisnotinyourbooksandmaps,itisoutthere.
8楼2013-12-30 21:20:46
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guanfeifei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-31 00:46:04
我也是只有taq酶的,偶尔有一次P出来就像中奖似的。。。真让人发疯,好好总结经验,唉!

[ 发自小木虫客户端 ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2013-12-30 21:38:58
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shefu1204

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
图位克隆是遇到过这种问题,可能是引物设计问题
10楼2013-12-30 21:48:41
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