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na466433306

金虫 (小有名气)

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[交流] 普通的PCR，一样的体系、程序，为什么结果不同？

最近做了很多PCR，差不多所有结果都出来之后，要回头来把所有PCR产物回收，可是却发现，条带和以前不一样了，是怎么回事呢？
有时候甚至一条条带都没有了，

特别伤心啊，除了东西少加了什么的，还有什么原因会这样呢？

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1楼 2013-04-18 21:31:50

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爱上文慧

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-19 08:22:59
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:19:50

我以前也出现过这种问题，后来重新做，直到条带正确，如果你找到原因告诉我哈，谢谢谢谢

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2楼2013-04-18 22:44:05

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新人小玥

木虫 (正式写手)

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na466433306(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-19 08:22:36
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:21:57

一条条带都没了，什么意思？条带不一样可能是在回收的时候发生了降解，或者根本就是第一次跑胶时就没跑开。
如果是再做一次PCR，没有的话，问题可能出在模板上。有的基因本身就很少，很难被扑获到，有点碰运气。或者是模板提取过程中没有纯化干净，容易降解。
除了这些常见的原因，我相信还有很多其它的原因，要纠结也没啥意思，还不如重做呢

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3楼2013-04-18 23:59:36

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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)

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na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:22:08

祝顺利,科研成果累累！！

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4楼2013-04-19 00:42:37

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XOooZzz

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na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:22:49

以前试过换一台PCR仪就不行的。前天试过从10uL扩大到15uL就不行的。lz是不是有什么细节和以前的条件不一样了？

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5楼2013-04-19 09:03:02

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chjinzhi

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na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:24:04
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:24:41

你回收后有没有跑过电泳验证一下呢？
或者说你的引物是不是质量不太好？
再者有没有可能是你胶回收时操作不对使得一些试剂的含量过高或存在残留，影响下游实验？

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6楼2013-04-19 10:35:20

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lanqingkuo

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na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:25:06

降解了吧，要好好保存的，时间太长也不行

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7楼2013-04-19 11:08:10

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wangqi1107

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na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:25:34

保存不好吧！再PCR一次就是了。都没有的话很科恩能够是你保存的问题。放-20一般没问题的。

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8楼2013-04-19 11:27:48

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na466433306

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2楼: Originally posted by 爱上文慧 at 2013-04-18 22:44:05
我以前也出现过这种问题，后来重新做，直到条带正确，如果你找到原因告诉我哈，谢谢谢谢

怀疑是我的酶失活了。。。

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9楼2013-04-19 19:20:14

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na466433306

金虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-18 23:59:36
一条条带都没了，什么意思？条带不一样可能是在回收的时候发生了降解，或者根本就是第一次跑胶时就没跑开。
如果是再做一次PCR，没有的话，问题可能出在模板上。有的基因本身就很少，很难被扑获到，有点碰运气。或 ...

嗯哪，原因真的是很多，最重要的是发现问题，解决问题，付诸实践！

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10楼2013-04-19 19:21:51

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na466433306

金虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by gzl9901 at 2013-04-19 00:42:37
祝顺利,科研成果累累！！

多谢！

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11楼2013-04-19 19:22:26

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na466433306

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5楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-04-19 09:03:02
以前试过换一台PCR仪就不行的。前天试过从10uL扩大到15uL就不行的。lz是不是有什么细节和以前的条件不一样了？

模板重新提取过，不过验证过了没问题，在想是不是其他东西，比如ntp什么的污染了，可这样的话也应该有杂的条带的吧？

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12楼2013-04-19 19:23:51

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na466433306

金虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by chjinzhi at 2013-04-19 10:35:20
你回收后有没有跑过电泳验证一下呢？
或者说你的引物是不是质量不太好？
再者有没有可能是你胶回收时操作不对使得一些试剂的含量过高或存在残留，影响下游实验？

最悲催的是我根本就没回收呢。。。是为了回收而跑的pcr没成功，悲剧啊

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13楼2013-04-19 19:24:36

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na466433306

金虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by lanqingkuo at 2013-04-19 11:08:10
降解了吧，要好好保存的，时间太长也不行

嗯哪，一切皆有可能

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14楼2013-04-19 19:25:02

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na466433306

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8楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-19 11:27:48
保存不好吧！再PCR一次就是了。都没有的话很科恩能够是你保存的问题。放-20一般没问题的。

我会验证一下的！加油！

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15楼2013-04-19 19:25:28

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zhangquan084

木虫 (正式写手)

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na466433306: 金币+1 2013-04-19 22:50:40

还是要严格实验的操作过程，这样才能很好地找原因。

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16楼2013-04-19 22:01:35

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16楼: Originally posted by zhangquan084 at 2013-04-19 22:01:35
还是要严格实验的操作过程，这样才能很好地找原因。

恩，做实验就是不能烦躁啊

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17楼2013-04-19 22:50:57

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fanchuannan

铜虫 (小有名气)

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重做吧，祝顺利。

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18楼2013-04-20 20:33:12

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andywang6137

木虫 (著名写手)

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★
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问题解决没？我最近也老出现这样的情况，进展不顺

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19楼2013-04-21 09:16:04

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na466433306

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19楼: Originally posted by andywang6137 at 2013-04-21 09:16:04
问题解决没？我最近也老出现这样的情况，进展不顺

这次具体原因好像是酶失活了

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20楼2013-04-21 15:55:13

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爱上文慧

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9楼: Originally posted by na466433306 at 2013-04-19 19:20:14
怀疑是我的酶失活了。。。...

哦，这样啊，那我以后也要注意这个问题了。谢谢！

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21楼2013-04-22 12:42:03

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na466433306

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21楼: Originally posted by 爱上文慧 at 2013-04-22 12:42:03
哦，这样啊，那我以后也要注意这个问题了。谢谢！

...

对啊，还是乖乖的让它在冰上待着比较好！一起加油吧

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22楼2013-04-23 15:30:11

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zhoudizi2013

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★
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祝好运，我最近也很不顺利，实验，总是这样！

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23楼2013-12-11 17:19:04

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