[交流] 普通的PCR，一样的体系、程序，为什么结果不同？

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有264人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

配制PCR反应体系在碎冰上好，还是经-80℃冰冻过的冰上好呢？已经有49人回复
哪位好心人给我讲讲DGGE后切胶回收、连接、转化、克隆到测序的过程？？已经有7人回复
PCR反应体系中各种成分的作用-搜集版已经有490人回复
miRNA反转录后PCR产物跑电泳，有点拖尾，什么原因啊？真心求助！！已经有13人回复
PCR反应体系求助已经有10人回复
PCR体系不同，扩不出片段已经有4人回复
ITS1和ITS4做样品体系中真菌菌株鉴定，为啥PCR产物竟然是2个条带？已经有11人回复
PCR体系放大后无目的片段已经有15人回复
一个关于qPCR标准曲线的问题。谢谢！已经有12人回复
PCR标准体系有关问题。。求高手解答已经有5人回复
做PCR，25μL体系和50μL体系，哪个比较稳定呢？已经有19人回复
PCR高手请进，小女子有事相求，我刚来金币不要嫌少啊，我只有这么多啊，全给你了已经有20人回复
TA克隆遇到的问题已经有10人回复
真菌ITS序列PCR扩增求助已经有9人回复
最近在做PCR，同样的体系，同样的模板，引物1能扩出来。引物2、3做不出来，去原因已经有6人回复
关于real-time PCR温度优化的问题已经有6人回复
ＲＴ－ＰＣＲ问题求助已经有18人回复
【求助/交流】pcr体系酶与反应体系分开已经有6人回复
【求助/交流】PCR反应体系的配制已经有11人回复
【求助/交流】PCR同一体系、温度结果却不同已经有18人回复
【求助/交流】ITS模板要求，PCR体系要求已经有8人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2013-04-18 21:31:50

爱上文慧

银虫 (小有名气)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 439.3
帖子: 56
在线: 36.8小时
虫号: 1916528

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-19 08:22:59
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:19:50

我以前也出现过这种问题，后来重新做，直到条带正确，如果你找到原因告诉我哈，谢谢谢谢

2楼2013-04-18 22:44:05

新人小玥

木虫 (正式写手)

MolEPI: 2
应助: 17 (小学生)
金币: 3203.8
帖子: 451
在线: 144.4小时
虫号: 704924

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
na466433306(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-19 08:22:36
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:21:57

一条条带都没了，什么意思？条带不一样可能是在回收的时候发生了降解，或者根本就是第一次跑胶时就没跑开。
如果是再做一次PCR，没有的话，问题可能出在模板上。有的基因本身就很少，很难被扑获到，有点碰运气。或者是模板提取过程中没有纯化干净，容易降解。
除了这些常见的原因，我相信还有很多其它的原因，要纠结也没啥意思，还不如重做呢

3楼2013-04-18 23:59:36

gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 6279.5
帖子: 11263
在线: 1769.2小时
虫号: 1294464

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:22:08

祝顺利,科研成果累累！！

4楼2013-04-19 00:42:37

XOooZzz

银虫 (小有名气)

应助: 28 (小学生)
金币: 241.8
帖子: 249
在线: 57.8小时
虫号: 1432381

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:22:49

以前试过换一台PCR仪就不行的。前天试过从10uL扩大到15uL就不行的。lz是不是有什么细节和以前的条件不一样了？

5楼2013-04-19 09:03:02

chjinzhi

银虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 706.4
帖子: 584
在线: 237.5小时
虫号: 1886329

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:24:04
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:24:41

你回收后有没有跑过电泳验证一下呢？
或者说你的引物是不是质量不太好？
再者有没有可能是你胶回收时操作不对使得一些试剂的含量过高或存在残留，影响下游实验？

6楼2013-04-19 10:35:20

lanqingkuo

木虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 2610.1
帖子: 242
在线: 72.5小时
虫号: 1338757

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:25:06

降解了吧，要好好保存的，时间太长也不行

7楼2013-04-19 11:08:10

wangqi1107

银虫 (小有名气)

应助: 57 (初中生)
金币: 192.8
帖子: 122
在线: 121.7小时
虫号: 995882

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
na466433306: 金币+1 2013-04-19 19:25:34

保存不好吧！再PCR一次就是了。都没有的话很科恩能够是你保存的问题。放-20一般没问题的。

8楼2013-04-19 11:27:48

na466433306

金虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 888.3
帖子: 85
在线: 38.8小时
虫号: 1694045

引用回帖:

2楼: Originally posted by 爱上文慧 at 2013-04-18 22:44:05
我以前也出现过这种问题，后来重新做，直到条带正确，如果你找到原因告诉我哈，谢谢谢谢

怀疑是我的酶失活了。。。

9楼2013-04-19 19:20:14

na466433306

金虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 888.3
帖子: 85
在线: 38.8小时
虫号: 1694045

引用回帖:

3楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-18 23:59:36
一条条带都没了，什么意思？条带不一样可能是在回收的时候发生了降解，或者根本就是第一次跑胶时就没跑开。
如果是再做一次PCR，没有的话，问题可能出在模板上。有的基因本身就很少，很难被扑获到，有点碰运气。或 ...

嗯哪，原因真的是很多，最重要的是发现问题，解决问题，付诸实践！

10楼2013-04-19 19:21:51