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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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baojunboy04

[交流] 【求助/交流】ITS模板要求,PCR体系要求 已有5人参与

最近在跑ITS总是跑不出来


测得的模板浓度是30-40,OD值在1.0-1.4
PCR体系:
buffer:2.5
mg:1.5
dntp:1.5
引物:各1.5
taq:0.3
模板:2
水:14.2
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-10 11:48
mg是什么东西?我没用过。每次扩增ITS,模板都进行梯度稀释,用原液、10倍、100倍三个梯度,总有一个梯度是能P出来的,三个梯度哪个最多都有可能。
PCR体系:
buffer:2.5
mg:1.5
dntp:1.5
引物:各1.5
taq:0.3
模板:2
水:14.2
总体积不是25微升,为什么用2.5微升的缓冲液?
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2010-04-09 13:58:55
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scelab:你好,除资源帖和灌水帖外,请勿纯表,谢谢! 2010-04-10 11:48
3楼2010-04-09 15:10:47
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ghost9106

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
ITS引物有好几对呢,可能换一下试试。
4楼2010-04-10 13:17:24
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baojunboy04

引用回帖:
Originally posted by ghost9106 at 2010-04-10 13:17:24:
ITS引物有好几对呢,可能换一下试试。

谢谢
5楼2010-04-12 22:10:41
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dyszz

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-04-09 13:58:55:
mg是什么东西?我没用过。每次扩增ITS,模板都进行梯度稀释,用原液、10倍、100倍三个梯度,总有一个梯度是能P出来的,三个梯度哪个最多都有可能。
PCR体系:
buffer:2.5
mg:1.5
dntp:1.5
引物:各1.5
taq: ...

mg  应该是镁吧~~
6楼2010-04-14 18:38:50
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我最近还遇到挺奇怪的问题呢,摸索退火温度时设了梯度,52度能扩出来,不设梯度了,其他条件都一样,连放的孔都一致,试了好几次都没扩出来,更是头大呢
7楼2010-04-14 19:56:50
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
Mg(2+)不在缓冲液里?要单独加?不知道,没遇到过这种情况。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2010-04-15 12:02:51
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baojunboy04

引用回帖:
Originally posted by lhm_hnyj at 2010-04-14 19:56:50:
我最近还遇到挺奇怪的问题呢,摸索退火温度时设了梯度,52度能扩出来,不设梯度了,其他条件都一样,连放的孔都一致,试了好几次都没扩出来,更是头大呢

ITS本身是不是对模板质量要求就比较高啊?我发现多头的很好扩,而单头的小型昆虫(螨)非常难扩,之前的chelex、STE单头提法都扩不出来,很是郁闷
9楼2010-04-28 20:59:31
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