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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】ITS模板要求，PCR体系要求
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baojunboy04

[交流] 【求助/交流】ITS模板要求，PCR体系要求 已有5人参与

最近在跑ITS总是跑不出来


测得的模板浓度是30-40，OD值在1.0-1.4
PCR体系：
buffer:2.5
mg:1.5
dntp:1.5
引物：各1.5
taq:0.3
模板：2
水：14.2
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1楼 2010-04-09 12:08:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-10 11:48
mg是什么东西？我没用过。每次扩增ITS，模板都进行梯度稀释，用原液、10倍、100倍三个梯度，总有一个梯度是能P出来的，三个梯度哪个最多都有可能。
PCR体系：
buffer:2.5
mg:1.5
dntp:1.5
引物：各1.5
taq:0.3
模板：2
水：14.2
总体积不是25微升，为什么用2.5微升的缓冲液？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2010-04-09 13:58:55
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baojunboy04
scelab:你好，除资源帖和灌水帖外，请勿纯表，谢谢！ 2010-04-10 11:48
3楼2010-04-09 15:10:47
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ghost9106

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ITS引物有好几对呢，可能换一下试试。
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4楼2010-04-10 13:17:24
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baojunboy04

引用回帖:
Originally posted by ghost9106 at 2010-04-10 13:17:24:
ITS引物有好几对呢，可能换一下试试。

谢谢
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5楼2010-04-12 22:10:41
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dyszz

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-04-09 13:58:55:
mg是什么东西？我没用过。每次扩增ITS，模板都进行梯度稀释，用原液、10倍、100倍三个梯度，总有一个梯度是能P出来的，三个梯度哪个最多都有可能。
PCR体系：
buffer:2.5
mg:1.5
dntp:1.5
引物：各1.5
taq: ...

mg  应该是镁吧~~
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6楼2010-04-14 18:38:50
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我最近还遇到挺奇怪的问题呢，摸索退火温度时设了梯度，52度能扩出来，不设梯度了，其他条件都一样，连放的孔都一致，试了好几次都没扩出来，更是头大呢
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7楼2010-04-14 19:56:50
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Mg（2+）不在缓冲液里？要单独加？不知道，没遇到过这种情况。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2010-04-15 12:02:51
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baojunboy04

引用回帖:
Originally posted by lhm_hnyj at 2010-04-14 19:56:50:
我最近还遇到挺奇怪的问题呢，摸索退火温度时设了梯度，52度能扩出来，不设梯度了，其他条件都一样，连放的孔都一致，试了好几次都没扩出来，更是头大呢

ITS本身是不是对模板质量要求就比较高啊？我发现多头的很好扩，而单头的小型昆虫（螨）非常难扩，之前的chelex、STE单头提法都扩不出来，很是郁闷
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9楼2010-04-28 20:59:31
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