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baojunboy04

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 883384

[交流] 【求助/交流】ITS模板要求，PCR体系要求已有5人参与

最近在跑ITS总是跑不出来

测得的模板浓度是30-40，OD值在1.0-1.4
PCR体系：
buffer:2.5
mg:1.5
dntp:1.5
引物：各1.5
taq:0.3
模板：2
水：14.2

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1楼2010-04-09 12:08:25

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dyszz

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 15
散金: 5
帖子: 166
在线: 17小时
虫号: 574859
注册: 2008-06-17
专业: 植物病理学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

引用回帖:

Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-04-09 13:58:55:
mg是什么东西？我没用过。每次扩增ITS，模板都进行梯度稀释，用原液、10倍、100倍三个梯度，总有一个梯度是能P出来的，三个梯度哪个最多都有可能。
PCR体系：
buffer:2.5
mg:1.5
dntp:1.5
引物：各1.5
taq: ...

mg 应该是镁吧~~

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6楼2010-04-14 18:38:50

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查看全部 9 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

专家经验: +248
MolEPI: 46
应助: 257 (大学生)
贵宾: 0.272
金币: 19236.6
散金: 1704
红花: 120
帖子: 6554
在线: 2763.6小时
虫号: 856414
注册: 2009-09-25
性别: GG
专业: 环境微生物学
管辖: 微生物

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-10 11:48

mg是什么东西？我没用过。每次扩增ITS，模板都进行梯度稀释，用原液、10倍、100倍三个梯度，总有一个梯度是能P出来的，三个梯度哪个最多都有可能。
PCR体系：
buffer:2.5
mg:1.5
dntp:1.5
引物：各1.5
taq:0.3
模板：2
水：14.2
总体积不是25微升，为什么用2.5微升的缓冲液？