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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR同一体系、温度结果却不同
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beidong6938

[交流] 【求助/交流】PCR同一体系、温度结果却不同 已有14人参与

我们做的pcr用的同一个体系，同一个温度，前两次扩增都有清晰地条带，第三次非常模糊！第一次和第二次都用的同一个模板，第三次是成批做的，也包括前面用的模板，但结果不好！求高人指教
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1楼 2010-05-07 10:35:28
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk:友情提示：你可以升级了，点击用户名右上角的升级即可~~ 2010-05-07 11:18:33
只能说可能是加样问题
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2楼2010-05-07 11:11:15
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):恩，有这种可能性~~欢迎多多交流~~ 2010-05-07 11:19:03
时间间隔的久吗？比较怀疑是模板存在问题。如果体系和程序完全没有改变，还有可能是操作的原因，比如操作时间过长，没有在冰盒上操作等等。
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3楼2010-05-07 11:11:48
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刘仕博

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
操作的任何细节都会导致最后结果不同的~
不过个人认为模板的嫌疑最大，呵呵
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生命在于折腾~
4楼2010-05-07 12:15:36
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xzx135

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第一模板问题，最重要的是加样的时候要混匀
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5楼2010-05-07 13:28:01
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-07 18:53:30
如果前面两次是分加的，那么最可能的原因有两个，一是混合样没有混匀，第二是分加的酶的量会大（因为比较粘，用量少，枪头会粘很多），所以可以适当考虑多加一点酶试试。
楼上几位说模板的可能性比较大，也很有道理，还是仔细看一下实验的区别吧。
有的时候就是这样，有的实验存在初始扩增随机选择问题，不是每次结果都一样
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6楼2010-05-07 16:49:17
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beidong6938

引用回帖:
Originally posted by hyde0706 at 2010-05-07 11:11:48:
时间间隔的久吗？比较怀疑是模板存在问题。如果体系和程序完全没有改变，还有可能是操作的原因，比如操作时间过长，没有在冰盒上操作等等。

时间不久，同一天做的
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7楼2010-05-07 18:06:26
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
成批做的各个组分的量不太准的，虽然方便，有可能影响结果。
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8楼2010-05-07 18:44:37
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-07 22:50:20
引用回帖:
Originally posted by wordsworth3180 at 2010-05-07 18:44:37:
成批做的各个组分的量不太准的，虽然方便，有可能影响结果。

成批做，充分混匀，其结果一定比分作要准，你觉得有没有道理
我以前做分子标记，跑图谱，样本至少95个，如果每次都分加，要死人的，我们都是制备混合样，充分混匀，结果都是非常可靠的

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-5-7 at 19:05 ]
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9楼2010-05-07 19:04:05
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gaiyf

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-07 22:50:44
原因有两个，一是混合样没有混匀，第二是分加的酶的量会大（因为比较粘，用量少，枪头会粘很多），所以可以适当考虑多加一点酶试试。
另外成批的做就是会容易出问题所以做得时候一定要仔细
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多看文献，多学知识
10楼2010-05-07 19:30:00
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