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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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beidong6938

[交流] 【求助/交流】PCR同一体系、温度结果却不同 已有14人参与

我们做的pcr用的同一个体系,同一个温度,前两次扩增都有清晰地条带,第三次非常模糊!第一次和第二次都用的同一个模板,第三次是成批做的,也包括前面用的模板,但结果不好!求高人指教
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陈思容

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk:友情提示:你可以升级了,点击用户名右上角的升级即可~~ 2010-05-07 11:18:33
只能说可能是加样问题
2楼2010-05-07 11:11:15
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hyde0706

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):恩,有这种可能性~~欢迎多多交流~~ 2010-05-07 11:19:03
时间间隔的久吗?比较怀疑是模板存在问题。如果体系和程序完全没有改变,还有可能是操作的原因,比如操作时间过长,没有在冰盒上操作等等。
3楼2010-05-07 11:11:48
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刘仕博

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
操作的任何细节都会导致最后结果不同的~
不过个人认为模板的嫌疑最大,呵呵
生命在于折腾~
4楼2010-05-07 12:15:36
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xzx135

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
第一模板问题,最重要的是加样的时候要混匀
5楼2010-05-07 13:28:01
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-07 18:53:30
如果前面两次是分加的,那么最可能的原因有两个,一是混合样没有混匀,第二是分加的酶的量会大(因为比较粘,用量少,枪头会粘很多),所以可以适当考虑多加一点酶试试。
楼上几位说模板的可能性比较大,也很有道理,还是仔细看一下实验的区别吧。
有的时候就是这样,有的实验存在初始扩增随机选择问题,不是每次结果都一样
6楼2010-05-07 16:49:17
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beidong6938

引用回帖:
Originally posted by hyde0706 at 2010-05-07 11:11:48:
时间间隔的久吗?比较怀疑是模板存在问题。如果体系和程序完全没有改变,还有可能是操作的原因,比如操作时间过长,没有在冰盒上操作等等。

时间不久,同一天做的
7楼2010-05-07 18:06:26
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
成批做的各个组分的量不太准的,虽然方便,有可能影响结果。
8楼2010-05-07 18:44:37
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-07 22:50:20
引用回帖:
Originally posted by wordsworth3180 at 2010-05-07 18:44:37:
成批做的各个组分的量不太准的,虽然方便,有可能影响结果。

成批做,充分混匀,其结果一定比分作要准,你觉得有没有道理
我以前做分子标记,跑图谱,样本至少95个,如果每次都分加,要死人的,我们都是制备混合样,充分混匀,结果都是非常可靠的

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-5-7 at 19:05 ]
9楼2010-05-07 19:04:05
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gaiyf

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-07 22:50:44
原因有两个,一是混合样没有混匀,第二是分加的酶的量会大(因为比较粘,用量少,枪头会粘很多),所以可以适当考虑多加一点酶试试。
另外成批的做就是会容易出问题所以做得时候一定要仔细
多看文献,多学知识
10楼2010-05-07 19:30:00
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