Originally posted by nininini at 2011-05-28 10:52:28:
第一次实验温度Tm=58度，Cp值22左右，后来相同体系，Tm=66度，结果Cp值降到了9左右，三四个基因都是这样，请问这是什么原因呢，结果可靠吗？

Originally posted by adslye at 2011-05-28 11:24:30:
感觉Cp=22太高了。
虽然Cp值多少都是现实情况的反应。跟Cp有关的因素其实也就是PCR反应产物量的影响因素。比如:模板量，扩增效率等。也就是说Cp和产物的量相关。
而Tm主要和精度有关（当然也会影响扩增效率以 ...

Originally posted by adslye at 2011-05-28 11:24:30:
感觉Cp=22太高了。
虽然Cp值多少都是现实情况的反应。跟Cp有关的因素其实也就是PCR反应产物量的影响因素。比如:模板量，扩增效率等。也就是说Cp和产物的量相关。
而Tm主要和精度有关（当然也会影响扩增效率以 ...

Originally posted by nininini at 2011-05-28 11:41:31:
另外，两次Cp值相差13，
没明白您说的二步三步什么意思，我是体外反转，用cDNA为模板，程序就是变性退火延伸三步法，不知道您还指哪些方面？

Originally posted by adslye at 2011-05-28 15:37:11:
PCR过程，三步法就是：变性退火延伸  二步就是：变性 退火+延伸
比方：我的程序是   ：  95°c 5s    60°c 30s   40个循环。
三步法扩增效率高些，两步法副产物相对少些。

你CT差得大吗？

Originally posted by nininini at 2011-05-28 15:53:33:
那我的是三步法，95°c 5s ，58度或66度 20s，72度 30s 其中一个差13，另外两三个差10左右