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bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] PCR扩增产物电泳,退火温度优化

各位虫友,我做的16SrDNA扩增后的片段进行1%琼脂糖凝胶电泳(见图),扩增时,1~12泳道的退火温度分别是从50~61度,后续要回收目的片段,那么哪个温度的好一点呢?依据是什么?先谢谢各位了!
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以马内利!
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

bear0329(金币+2): 好的,谢谢啦~要是换了引物是不是要重新选择退火温度啊 2011-06-21 10:56:42
你看哪条带亮就选那个退火温度进行大批量PCR。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-06-21 10:49:47
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zboter

银虫 (正式写手)

如果是亮度差不多的话,我建议用退火温度较高的回收,因为这样的条带特异性高
3楼2011-06-21 15:09:39
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bear0329

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zboter at 2011-06-21 15:09:39:
如果是亮度差不多的话,我建议用退火温度较高的回收,因为这样的条带特异性高

恩,谢谢啊,那就选9号产不多吧?
以马内利!
4楼2011-06-21 15:19:03
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hc1027

木虫 (正式写手)

11号似乎比价干净
5楼2011-06-21 16:16:24
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bear0329

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by hc1027 at 2011-06-21 16:16:24:
11号似乎比价干净

恩,是的啊,但是产量没那么多啊?该怎么选呢
以马内利!
6楼2011-06-21 22:27:49
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78bio

新虫 (初入文坛)

特异性还不是很好啊,可以试试热启动DNTP哦,或者热启动引物
7楼2011-06-21 23:03:17
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bear0329

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 78bio at 2011-06-21 23:03:17:
特异性还不是很好啊,可以试试热启动DNTP哦,或者热启动引物

不知具体操作这样,请指教~先谢谢啦
以马内利!
8楼2011-06-21 23:28:48
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ct86117

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-06-22 16:49:09
实验的目的是什么呢?单个菌株鉴定的话11、12比较合适,因为不用考虑得率~
9楼2011-06-22 14:56:05
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-06-23 14:49:32
引用回帖:
Originally posted by ct86117 at 2011-06-22 14:56:05:
实验的目的是什么呢?单个菌株鉴定的话11、12比较合适,因为不用考虑得率~

嗯,同意,11和12的非特异性扩增非常少,而且目的条带也比较亮!
10楼2011-06-22 18:18:56
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