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PCR扩增产物电泳,退火温度优化
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bear0329
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PCR扩增产物电泳,退火温度优化
各位虫友,我做的16SrDNA扩增后的片段进行1%琼脂糖凝胶电泳(见图),扩增时,1~12泳道的退火温度分别是从50~61度,后续要回收目的片段,那么哪个温度的好一点呢?依据是什么?先谢谢各位了!
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2011-06-21 10:11:22
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【答案】应助回帖
bear0329(金币+2): 好的,谢谢啦~要是换了引物是不是要重新选择退火温度啊 2011-06-21 10:56:42
你看哪条带亮就选那个退火温度进行大批量PCR。
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2011-06-21 10:49:47
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如果是亮度差不多的话,我建议用退火温度较高的回收,因为这样的条带特异性高
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2011-06-21 15:09:39
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Originally posted by
zboter
at 2011-06-21 15:09:39:
如果是亮度差不多的话,我建议用退火温度较高的回收,因为这样的条带特异性高
恩,谢谢啊,那就选9号产不多吧?
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4楼
2011-06-21 15:19:03
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2011-06-21 16:16:24
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Originally posted by
hc1027
at 2011-06-21 16:16:24:
11号似乎比价干净
恩,是的啊,但是产量没那么多啊?该怎么选呢
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6楼
2011-06-21 22:27:49
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特异性还不是很好啊,可以试试热启动DNTP哦,或者热启动引物
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2011-06-21 23:03:17
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78bio
at 2011-06-21 23:03:17:
特异性还不是很好啊,可以试试热启动DNTP哦,或者热启动引物
不知具体操作这样,请指教~先谢谢啦
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8楼
2011-06-21 23:28:48
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西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-06-22 16:49:09
实验的目的是什么呢?单个菌株鉴定的话11、12比较合适,因为不用考虑得率~
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9楼
2011-06-22 14:56:05
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ct86117
at 2011-06-22 14:56:05:
实验的目的是什么呢?单个菌株鉴定的话11、12比较合适,因为不用考虑得率~
嗯,同意,11和12的非特异性扩增非常少,而且目的条带也比较亮!
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10楼
2011-06-22 18:18:56
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