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求助，PCR的电泳结果出了未知问题
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这是我电泳的条带，应该在700BP和550BP出目的带，结果在最下面有很严重的拖尾，目的条带看不出来，请问各位大侠是什么原因？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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beautybanana
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2楼2011-05-19 11:01:25
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3楼2011-05-19 11:55:58
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ycyycy
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6楼2011-05-19 14:05:54
7楼2011-05-19 14:17:30
★ ★
西瓜(金币+2): 反馈很积极，要鼓励的，呵呵~下次把问题的补充放在1楼吧，点击下方的“编辑”就可以了。 2011-05-19 16:25:33
西瓜(金币+2): 反馈很积极，要鼓励的，呵呵~下次把问题的补充放在1楼吧，点击下方的“编辑”就可以了。 2011-05-19 16:25:33
谢谢大家的热心，心里很温暖 这个本身就是退火温度的PCR，从左到右分别是55，57，61，63和65度。 反映体系是：ddH2O 17.5μL 10×Taq reaction buffer 2.5μL dNTP（2.5mM） 1μL P1（10μM） 1μL P2（10μM） 1μL 基因组DNA 1μL Taq DNA polymerase（2.5U/μL） 1μL Total Vol. 25μL 55的在1000Bp左右有个微弱的带。。。 大家看这个体系有问题吗？ |
8楼2011-05-19 14:18:13
lly198784
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9楼2011-05-19 14:19:06
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 欢迎新虫交流！ 2011-05-23 00:55:12
yanyuyu(金币+2): 谢谢你，我这个图本身就是梯度的PCR，有做了几次好了些，准备加大循环次数 2011-05-23 14:01:34
西瓜(金币+4): 欢迎新虫交流！ 2011-05-23 00:55:12
yanyuyu(金币+2): 谢谢你，我这个图本身就是梯度的PCR，有做了几次好了些，准备加大循环次数 2011-05-23 14:01:34
| 个人感觉：模板有些问题，楼主说是基因组DNA模板多大量（不是体积），前端不太像引物二聚体！估计PCR体系应该不会有问题吧。。体系出问题也就是特异性可能会有所差异。。总应该有带才是！按照你退火温度55时有1000bp的带而温度升高后同样位置没有条带估计是引物没有结合上。。引物的特异性也有些问题。。或者模板量太低。。建议做个NESTING PCR。。如果讨厌设计两套引物的话，最快的方法用你55度的PCR产物当模板。。再用你的引物P一次或者干脆加大循环数。。。看能不能出来。。目的带。。如果出来了再优化优化条件。。 |
10楼2011-05-21 15:26:40
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