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yanyuyu

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,PCR的电泳结果出了未知问题

这是我电泳的条带,应该在700BP和550BP出目的带,结果在最下面有很严重的拖尾,目的条带看不出来,请问各位大侠是什么原因?
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ycyycy

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 同感 2011-05-19 16:22:45
拖尾可能是引物二聚体,上样量10微升吗?
换个温度和反应条件试一试,如果之前有人扩增过,请教一下前辈。
6楼2011-05-19 14:05:54
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查看全部 12 个回答

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-05-19 12:33:00
1949stone(金币+2): 越看越有道理 2011-05-19 12:34:16
引用回帖:
Originally posted by yanyuyu at 2011-05-19 10:05:42:
这是我电泳的条带,应该在700BP和550BP出目的带,结果在最下面有很严重的拖尾,目的条带看不出来,请问各位大侠是什么原因?

在750bp和500bp(DL2000的marker是吧)处没有目的条带,没有扩增出产物,可能是引物或是PCR程序问题,再仔细核对下~做个温度梯度,不行的话就检查下引物的特异性了~
2楼2011-05-19 11:01:25
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): 来了 2011-05-19 12:31:59
marker 标记一下。
没有条带原因太多了:

1:PCR体系的问题 不知道你有没有进行温度梯度的设定呢?还有你的体系是怎么样的?
2:引物的退火温度和稀释的均匀程度也会影响PCR的效果。

重复做一次。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-19 11:55:58
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奔跑的西瓜

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-05-19 12:33:14
1949stone: 是非特异性 貌似 2011-05-19 12:33:47
貌似是降解了,你检下你的模板DNA吧,看看怎么样,或者是引物非特异性结合了
4楼2011-05-19 12:23:10
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