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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by yanyuyu at 2011-05-19 10:05:42:
这是我电泳的条带,应该在700BP和550BP出目的带,结果在最下面有很严重的拖尾,目的条带看不出来,请问各位大侠是什么原因?

你的Marker是多大的?第一个好像有点东西
看其他结果,就是没P出来。
这种情况可能会有许多原因:
(1)引物不适合,可能是引物设计时就有问题,不能扩增出目的条带,或者引物合成有问题(公司有时候会搞错的,要好好对对序列)
(2)模板的问题,模板降解或者没有成功提取出来,或者反转录的RNA降解了等
(3)反应体系的问题,反应体系中,Taq酶是非常关键的,不同PCR根据实验要求选用不同Taq酶;另外就是反应体系,各个成分的加入量,主要是模板、Taq酶和Mg离子的量的不同,这个要进行优化的。
(4)在就是反应条件了,大家一般都强调退火温度,其实还有各部反应时间,也是挺重要的,这里就不具体讲了。
祝你试验顺利,在有问题,可以联系我。
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
11楼2011-05-21 19:12:42
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人感觉是基因组问题,不知道用阳性对照结果如何。基因组最好定下量,不能有降解。
12楼2011-05-22 23:52:31
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