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yanyuyu

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助，PCR的电泳结果出了未知问题

这是我电泳的条带，应该在700BP和550BP出目的带，结果在最下面有很严重的拖尾，目的条带看不出来，请问各位大侠是什么原因？

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1楼2011-05-19 10:05:42

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疯狂修行者

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【答案】应助回帖

引用回帖:

Originally posted by yanyuyu at 2011-05-19 10:05:42:
这是我电泳的条带，应该在700BP和550BP出目的带，结果在最下面有很严重的拖尾，目的条带看不出来，请问各位大侠是什么原因？

你的Marker是多大的？第一个好像有点东西
看其他结果，就是没P出来。
这种情况可能会有许多原因：
（1）引物不适合，可能是引物设计时就有问题，不能扩增出目的条带，或者引物合成有问题（公司有时候会搞错的，要好好对对序列）
（2）模板的问题，模板降解或者没有成功提取出来，或者反转录的RNA降解了等
（3）反应体系的问题，反应体系中，Taq酶是非常关键的，不同PCR根据实验要求选用不同Taq酶；另外就是反应体系，各个成分的加入量，主要是模板、Taq酶和Mg离子的量的不同，这个要进行优化的。
（4）在就是反应条件了，大家一般都强调退火温度，其实还有各部反应时间，也是挺重要的，这里就不具体讲了。
祝你试验顺利，在有问题，可以联系我。