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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增产物电泳，退火温度优化
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bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] PCR扩增产物电泳，退火温度优化

各位虫友，我做的16SrDNA扩增后的片段进行1%琼脂糖凝胶电泳（见图），扩增时，1~12泳道的退火温度分别是从50~61度，后续要回收目的片段，那么哪个温度的好一点呢？依据是什么？先谢谢各位了！
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以马内利！
1楼 2011-06-21 10:11:22
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

bear0329(金币+2): 好的，谢谢啦~要是换了引物是不是要重新选择退火温度啊 2011-06-21 10:56:42
你看哪条带亮就选那个退火温度进行大批量PCR。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-06-21 10:49:47
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zboter

银虫 (正式写手)
如果是亮度差不多的话，我建议用退火温度较高的回收，因为这样的条带特异性高
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3楼2011-06-21 15:09:39
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bear0329

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zboter at 2011-06-21 15:09:39:
如果是亮度差不多的话，我建议用退火温度较高的回收，因为这样的条带特异性高

恩，谢谢啊，那就选9号产不多吧？
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以马内利！
4楼2011-06-21 15:19:03
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hc1027

木虫 (正式写手)
11号似乎比价干净
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5楼2011-06-21 16:16:24
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bear0329

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hc1027 at 2011-06-21 16:16:24:
11号似乎比价干净

恩，是的啊，但是产量没那么多啊？该怎么选呢
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以马内利！
6楼2011-06-21 22:27:49
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78bio

新虫 (初入文坛)
特异性还不是很好啊，可以试试热启动DNTP哦，或者热启动引物
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7楼2011-06-21 23:03:17
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bear0329

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 78bio at 2011-06-21 23:03:17:
特异性还不是很好啊，可以试试热启动DNTP哦，或者热启动引物

不知具体操作这样，请指教~先谢谢啦
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以马内利！
8楼2011-06-21 23:28:48
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ct86117

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎新虫交流 2011-06-22 16:49:09
实验的目的是什么呢？单个菌株鉴定的话11、12比较合适，因为不用考虑得率~
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9楼2011-06-22 14:56:05
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)
★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-06-23 14:49:32
引用回帖:
Originally posted by ct86117 at 2011-06-22 14:56:05:
实验的目的是什么呢？单个菌株鉴定的话11、12比较合适，因为不用考虑得率~

嗯，同意，11和12的非特异性扩增非常少，而且目的条带也比较亮！
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10楼2011-06-22 18:18:56
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