应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR退火温度
91/1返回列表
查看: 1724  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

嘉笛

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR退火温度

请大家帮忙看下面的引物，退火温度应该设为多少？或整个PCR程序应该怎么设定？目的基因片段全长705bp，请大家告诉具体数值或操作步骤，不要写一些公式或软件，谢谢啦！
Sense primers 5’-ATCTCGAGAAAAGAATTGTTGGTGGTTCTG-3’
Antisense primers  5’-ATGTGCGGCCGCTTATCATGTAGAAAACTTTGTATCCA-3’
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-21 16:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
rainwander(金币+1):呵呵，鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 19:11:21
silicare(金币+2):教育意义更精彩 2010-12-22 08:43:10
引用回帖:
Originally posted by 嘉笛 at 2010-12-21 16:00:24:
请大家帮忙看下面的引物，退火温度应该设为多少？或整个PCR程序应该怎么设定？目的基因片段全长705bp，请大家告诉具体数值或操作步骤，不要写一些公式或软件，谢谢啦！
Sense primers 5’-ATCTCGAGAAAAGAATTGTTG ...

伸手党
公司给你合成引物的时候，不是附了合成单了吗，上面有
一般程序：94 5min 94 30s Tm 30s 72 1min 33cycles 72 10min end
其实Tm可以做个梯度试试
多看看文献吧，不要纯伸手啦
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-21 16:12:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 19:11:26
1949stone(金币+2):很热心 继续鼓励 2010-12-21 22:45:14
你不想知道为什么要选这些数值的话，我可以告诉你：
两条引物的Tm分别为：Sence：61.66，antisence：66.66
反应程序：
94 5min
以下5个循环
94 30s
56 30s
72 45s
循环结束
以下25个循环
94 30s
63 30s
72 45s
循环结束

72 10min
4   hold
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-12-21 16:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
果然是伸手党!自己动手，丰衣足食！
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-21 16:22:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-22 08:40:19
引用回帖:
Originally posted by 嘉笛 at 2010-12-21 16:00:24:
请大家帮忙看下面的引物，退火温度应该设为多少？或整个PCR程序应该怎么设定？目的基因片段全长705bp，请大家告诉具体数值或操作步骤，不要写一些公式或软件，谢谢啦！
Sense primers 5’-ATCTCGAGAAAAGAATTGTTG ...

退火温度60度左右吧，如果想摸条件，做一个梯度PCR就行了
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-12-21 19:07:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘉笛

木虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):如果你连基本概念都不清楚你觉得这个实验能往下继续吗，鼓励一下新手，还是先学习一下教科书吧 2010-12-22 08:44:18
我学药物分析的，开始都不知道什么是Tm
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-12-22 08:35:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiefl1984

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-02-24 09:10:45
嘉笛(金币+20): 谢谢 2011-03-01 15:12:35
sense primer
Tm（1M Na+）       75.4
Tm（50mM Na+）     53.8
%GC                40
Anti Primer     
Tm（1M Na+）       81
Tm（50mM Na+）     59.4
%GC                42.1
可以参照以上数据先做梯度PCR，再进一步确定特异性较好的退火温度
希望对你有帮助
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-02-24 08:38:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyz20050505

木虫 (正式写手)
退火温度有啥好纠结的，一般的PCR，管你什么引物上去就55读退火，不行再调，很多时间上下浮动5度甚至10度都是没有好大的区别。
赞一下 回复此楼
8楼2011-02-24 19:34:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleshen

银虫 (小有名气)
二楼好神奇，怎么知道的这么详细呀？
赞一下 回复此楼
9楼2011-02-24 22:56:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 嘉笛 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭