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嘉笛

木虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 1983
帖子: 167
在线: 55.9小时
虫号: 548334

[交流] 【求助/交流】PCR退火温度

请大家帮忙看下面的引物，退火温度应该设为多少？或整个PCR程序应该怎么设定？目的基因片段全长705bp，请大家告诉具体数值或操作步骤，不要写一些公式或软件，谢谢啦！
Sense primers 5’-ATCTCGAGAAAAGAATTGTTGGTGGTTCTG-3’
Antisense primers 5’-ATGTGCGGCCGCTTATCATGTAGAAAACTTTGTATCCA-3’

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1楼 2010-12-21 16:00:24

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yabxxh

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 19:11:26
1949stone(金币+2):很热心继续鼓励 2010-12-21 22:45:14

你不想知道为什么要选这些数值的话，我可以告诉你：
两条引物的Tm分别为：Sence：61.66，antisence：66.66
反应程序：
94 5min
以下5个循环
94 30s
56 30s
72 45s
循环结束
以下25个循环
94 30s
63 30s
72 45s
循环结束

72 10min
4 hold

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3楼2010-12-21 16:22:15

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feiye2214

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 3 (幼儿园)
金币: 1824.9
帖子: 564
在线: 209小时
虫号: 883642

★ ★ ★
rainwander(金币+1):呵呵，鼓励积极参与~~~ 2010-12-21 19:11:21
silicare(金币+2):教育意义更精彩 2010-12-22 08:43:10

引用回帖:

Originally posted by 嘉笛 at 2010-12-21 16:00:24:
请大家帮忙看下面的引物，退火温度应该设为多少？或整个PCR程序应该怎么设定？目的基因片段全长705bp，请大家告诉具体数值或操作步骤，不要写一些公式或软件，谢谢啦！
Sense primers 5’-ATCTCGAGAAAAGAATTGTTG ...

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