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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 退火时间的长短对PCR会有什么影响
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我是果果

新虫 (初入文坛)

[求助] 退火时间的长短对PCR会有什么影响

退火时间可以改变吗？我们都是30s，如果加长会有什么影响呢？求各位高手指点。。。
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1楼 2011-05-05 09:51:28
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475502411

铜虫 (著名写手)
还有，预变性和变形时间不一样有什么影响？
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
2楼2011-05-05 11:09:58
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

我是果果(金币+2): 谢谢回帖 2011-05-05 16:38:14
其实PCR的退火温度和时间是根据你的引物和目的片段大小而定的。。这个还真没有试过，你可以尝试一下。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-05 11:22:25
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 学习了！ 2011-05-05 12:42:10
我是果果(金币+2): 2011-05-05 16:38:27
时间短一些可以得到更好的效果. 因为, polymerase 在 AT(退火温度）.时也会有一些活性. 所以在A.T.的时间过长, 会极大的增加非特异性扩增的风险
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4楼2011-05-05 11:26:59
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wzwhq

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-05 11:09:58:
还有，预变性和变形时间不一样有什么影响？

预变性是10min，变性是30s就行，预变性和变性时间都是不一样
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5楼2011-05-05 12:15:51
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475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wzwhq at 2011-05-05 12:15:51:
预变性是10min，变性是30s就行，预变性和变性时间都是不一样

那预变性10min和5min有什么不同？
变性30s和45s有什么不同？
对结果会有什么样的影响啊？
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
6楼2011-05-05 14:15:03
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yanying198

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-05 16:50:08
退火温度和片段长度相关，片段长退火时间长一些，一般2min可以
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7楼2011-05-05 15:41:46
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我是果果

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yanying198 at 2011-05-05 15:41:46:
退火温度和片段长度相关，片段长退火时间长一些，一般2min可以

这个是延伸时间吧？
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8楼2011-05-05 18:37:42
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yanying198

新虫 (小有名气)
哦 不好意思啊，我们退火一般1min可以了
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9楼2011-05-05 20:02:11
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wzwhq

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-06 10:11:36
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-05 14:15:03:
那预变性10min和5min有什么不同？
变性30s和45s有什么不同？
对结果会有什么样的影响啊？

影响不是特别大，你要是想变性充分一点就时间长点。
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10楼2011-05-06 09:16:50
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