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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 退火时间的长短对PCR会有什么影响
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我是果果(金币+1): 2011-05-07 16:32:19
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-05 14:15:03:
那预变性10min和5min有什么不同？
变性30s和45s有什么不同？
对结果会有什么样的影响啊？

预变性和变性的时间是由模板的长度和GC含量来确定的，当然这个时间并不像退火温度那样有个可以参考的计算公式，一般来讲预变性95℃，5min完全可以解开模板的双链，如果模板分子量比较大（比如是从基因组DNA中进行扩增，那时间延伸到10min也是可以的），变性时间通常也是30S足够了，也可以根据扩增片段长度（是扩增片段长度而不是原始模板长度）和GC含量进行微调
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11楼2011-05-06 10:41:12
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-06 18:20:30
引用回帖:
Originally posted by 我是果果 at 2011-05-05 09:51:28:
退火时间可以改变吗？我们都是30s，如果加长会有什么影响呢？求各位高手指点。。。

退火是为了让引物与模板结合，一般来讲30s足够了，如果退火时间延长那么引物在酶的作用下就会进行扩增反应，因此在扩增比较短的片段时通常会把退火和延伸步骤合并（即所谓的两步法扩增）
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12楼2011-05-06 10:46:03
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