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空谷幽风

金虫 (正式写手)

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我是果果(金币+1): 2011-05-07 16:32:19
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-05 14:15:03:
那预变性10min和5min有什么不同?
变性30s和45s有什么不同?
对结果会有什么样的影响啊?

预变性和变性的时间是由模板的长度和GC含量来确定的,当然这个时间并不像退火温度那样有个可以参考的计算公式,一般来讲预变性95℃,5min完全可以解开模板的双链,如果模板分子量比较大(比如是从基因组DNA中进行扩增,那时间延伸到10min也是可以的),变性时间通常也是30S足够了,也可以根据扩增片段长度(是扩增片段长度而不是原始模板长度)和GC含量进行微调
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11楼2011-05-06 10:41:12
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-06 18:20:30
引用回帖:
Originally posted by 我是果果 at 2011-05-05 09:51:28:
退火时间可以改变吗?我们都是30s,如果加长会有什么影响呢?求各位高手指点。。。

退火是为了让引物与模板结合,一般来讲30s足够了,如果退火时间延长那么引物在酶的作用下就会进行扩增反应,因此在扩增比较短的片段时通常会把退火和延伸步骤合并(即所谓的两步法扩增)
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12楼2011-05-06 10:46:03
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