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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 退火时间的长短对PCR会有什么影响
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我是果果

新虫 (初入文坛)

[求助] 退火时间的长短对PCR会有什么影响

退火时间可以改变吗？我们都是30s，如果加长会有什么影响呢？求各位高手指点。。。
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1楼 2011-05-05 09:51:28
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-06 18:20:30
引用回帖:
Originally posted by 我是果果 at 2011-05-05 09:51:28:
退火时间可以改变吗？我们都是30s，如果加长会有什么影响呢？求各位高手指点。。。

退火是为了让引物与模板结合，一般来讲30s足够了，如果退火时间延长那么引物在酶的作用下就会进行扩增反应，因此在扩增比较短的片段时通常会把退火和延伸步骤合并（即所谓的两步法扩增）
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
12楼2011-05-06 10:46:03
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475502411

铜虫 (著名写手)
还有，预变性和变形时间不一样有什么影响？
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
2楼2011-05-05 11:09:58
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

我是果果(金币+2): 谢谢回帖 2011-05-05 16:38:14
其实PCR的退火温度和时间是根据你的引物和目的片段大小而定的。。这个还真没有试过，你可以尝试一下。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-05 11:22:25
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 学习了！ 2011-05-05 12:42:10
我是果果(金币+2): 2011-05-05 16:38:27
时间短一些可以得到更好的效果. 因为, polymerase 在 AT(退火温度）.时也会有一些活性. 所以在A.T.的时间过长, 会极大的增加非特异性扩增的风险
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4楼2011-05-05 11:26:59
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