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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 退火时间的长短对PCR会有什么影响
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我是果果

新虫 (初入文坛)

[求助] 退火时间的长短对PCR会有什么影响

退火时间可以改变吗？我们都是30s，如果加长会有什么影响呢？求各位高手指点。。。
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1楼 2011-05-05 09:51:28
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我是果果(金币+1): 2011-05-07 16:32:19
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-05 14:15:03:
那预变性10min和5min有什么不同？
变性30s和45s有什么不同？
对结果会有什么样的影响啊？

预变性和变性的时间是由模板的长度和GC含量来确定的，当然这个时间并不像退火温度那样有个可以参考的计算公式，一般来讲预变性95℃，5min完全可以解开模板的双链，如果模板分子量比较大（比如是从基因组DNA中进行扩增，那时间延伸到10min也是可以的），变性时间通常也是30S足够了，也可以根据扩增片段长度（是扩增片段长度而不是原始模板长度）和GC含量进行微调
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11楼2011-05-06 10:41:12
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475502411

铜虫 (著名写手)
还有，预变性和变形时间不一样有什么影响？
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
2楼2011-05-05 11:09:58
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

我是果果(金币+2): 谢谢回帖 2011-05-05 16:38:14
其实PCR的退火温度和时间是根据你的引物和目的片段大小而定的。。这个还真没有试过，你可以尝试一下。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-05 11:22:25
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 学习了！ 2011-05-05 12:42:10
我是果果(金币+2): 2011-05-05 16:38:27
时间短一些可以得到更好的效果. 因为, polymerase 在 AT(退火温度）.时也会有一些活性. 所以在A.T.的时间过长, 会极大的增加非特异性扩增的风险
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4楼2011-05-05 11:26:59
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