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嘉笛

木虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】PCR退火温度

请大家帮忙看下面的引物，退火温度应该设为多少？或整个PCR程序应该怎么设定？目的基因片段全长705bp，请大家告诉具体数值或操作步骤，不要写一些公式或软件，谢谢啦！
Sense primers 5’-ATCTCGAGAAAAGAATTGTTGGTGGTTCTG-3’
Antisense primers 5’-ATGTGCGGCCGCTTATCATGTAGAAAACTTTGTATCCA-3’

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1楼 2010-12-21 16:00:24

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xiefl1984

木虫 (小有名气)

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虫号: 528140

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-02-24 09:10:45
嘉笛(金币+20): 谢谢 2011-03-01 15:12:35

sense primer
Tm（1M Na+）    75.4
Tm（50mM Na+）    53.8
%GC             40
Anti Primer
Tm（1M Na+）    81
Tm（50mM Na+）    59.4
%GC             42.1
可以参照以上数据先做梯度PCR，再进一步确定特异性较好的退火温度
希望对你有帮助

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