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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么不同PCR仪扩增结果不同
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cib百里酚蓝

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么不同PCR仪扩增结果不同

在下最近做PCR,扩增某植物基因组的DNA，在国产仪器上扩出条带单一，产物量较少，同样的条件在进口仪器上却扩出很多非特异性条带，阴性对照也有条带，请高手指点一下该如何调一下条件
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相似者相溶
1楼 2011-08-24 16:50:14
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这应该不是机器的问题，而是你操作的问题，出现了假阳性。
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-08-24 17:01:07
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 是有可能 2011-08-24 20:09:42
cib百里酚蓝(金币+5): 2011-08-24 21:57:23
引用回帖:
1楼: Originally posted by cib百里酚蓝 at 2011-08-24 16:50:14:
在下最近做PCR,扩增某植物基因组的DNA，在国产仪器上扩出条带单一，产物量较少，同样的条件在进口仪器上却扩出很多非特异性条带，阴性对照也有条带，请高手指点一下该如何调一下条件

机器不同升降温速率不同，或许需要一定的摸索，甚至机器不同，显示的温度和实际都有可能不一致，仅供参考！
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3楼2011-08-24 17:10:54
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-24 19:31:30
呵呵，遇到过类似的问题，同样是Techene的机子，3000的25孔和412的96孔，同样的样品扩出来也不一样！建议在扩增出条带的机子上优化条件！
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jiayoubashaonian
4楼2011-08-24 19:01:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
西瓜(金币+1): good 2011-08-25 17:25:43
其实你只需要用一个PCR仪完成你的扩增就OK了，
可以优化一下你的PCR体系
设置温度梯度进行扩增
选择合适的延伸时间
就基本OK了。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-08-25 09:17:59
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heroyl

木虫 (正式写手)
有这种情况的，我们一般做自己的东西一直用同一个仪器的，你的在两个上都能做出来那你就根据你的结果再考虑用哪个，再优化条件！
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
6楼2011-08-25 10:48:34
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xbl3688

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good 2011-08-25 17:26:12
1、不同的机子、甚至同一台机子同样的程序还有可能出现不一样的结果；
2、扩出的条带比较浅可以做一个降落pcr，再用自己之前延伸的温度扩25个循环，这样结果应该会好点。也可以做梯度pcr摸索最佳延伸温度；
3、LZ第二次扩基因的时候阴性对照都有条带了，有可能操作过程体系污染了。模板量加多了也会出现杂带，或是条带不清晰的情况
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
7楼2011-08-25 15:26:12
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jb1003

新虫 (初入文坛)
产物量少，可以用所得的PCR产物，为模板再进行一次PCR这样可以增加产物量。有非特异性条带，我认为不是机子问题，而是PCR本身就存在，我为了P一段ITS序列，已经做了半年了，50个样品还做没完，因为P的重复性太差了。基本上把该注意，该优化的，都整了。依然做不出好结果。悲催啊！
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8楼2011-08-26 17:19:18
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