24小时热门版块排行榜    

查看: 1937  |  回复: 4

you281115413

新虫 (初入文坛)

[求助] 放线菌PCR扩增的条件与扩增样品的量

扩增了很长时间,总是引物二聚体,没有个合适的好的程序,希望大家不吝赐教。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验、写作、杂七杂八

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guojing113

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2011-12-06 20:08:37
在进行PCR扩增的时候,有引物二聚体是很正常的现在,如果引物设计的没有问题的话,正常扩增出结果应该没有问题,而放线菌的基因组的GC含量比较高,达到70%以上,一般的试剂扩增的效果也许不好,建议用专门的GC缓冲液做PCR实验
听雨
2楼2011-12-06 16:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

williamskia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wolfebst(金币+3): 鼓励应助 2011-12-06 21:25:07
三个建议:
1)重新提取模版DNA并加大模版DNA的量
2)适当减少引物浓度
3)括增体系中加入5%-8%终浓度的DMSO。不用担心突变的问题,用活力比较低的pfu, PCR产物保真性很好的,也能比较好的有条带。
3楼2011-12-06 21:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
scelab(金币+4): 高手,谢谢回复哦~~~ 2011-12-07 00:16:25
1、可以加入DMSO 5~10%没问题。
2、引物、模板用一般的量就行了。
3、可以摸索温度梯度55——70℃。
预变性94℃  5min
变性 94  30S
退火 60  30S
延伸  72  30S
(30个循环)
延伸 72 10min(可缩短至3min)
4楼2011-12-06 23:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plumplumgxc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

TAKARA 有GC buffer,直接用就可以了
科研这条道不好走啊。。。
5楼2011-12-07 08:59:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 you281115413 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 让我中一个面上吧! +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见